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其他名稱:T細(xì)胞生長因子(T cell growth factor,TCRF)
定義:主要由活化的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生的具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子。是所有T細(xì)胞亞群的生長因子,并可促進活化B細(xì)胞增殖,故為調(diào)控免疫應(yīng)答的重要因子,也參與抗體反應(yīng)、造血和腫瘤監(jiān)視。
【中文名稱】: 白細(xì)胞介素-2
【簡寫拼音】: BXBJS-2
【英文名稱】: Interleukin-2
【所屬類別】: 免疫增強劑||其他抗腫瘤藥及輔助治療藥
【別名】 白間素, 欣吉爾, T細(xì)胞生長因子 ,白細(xì)胞介素-2
【外文名】Interleukin-2 ,IL-2
【適應(yīng)癥】 白介素-2是一個分子量為14500的糖蛋白,它刺激已被特異性抗原或致絲裂因數(shù)啟動的T細(xì)胞增殖。重組白介素-2可用于臨床研究。主要用于腎癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效(Rossenberg)。LAK細(xì)胞代表1個有單核巨噬細(xì)胞,B和T淋巴細(xì)胞特征的異原的細(xì)胞體。這些LAK細(xì)胞似乎對癌細(xì)胞有特異作用。此外,LAK細(xì)胞(不象T細(xì)胞)介導(dǎo)殺傷不受MHC的約束。[1]
1 材料和方法:
1.1 制備粗制IL-2無菌采血,肝素抗凝,用RPMI1640按1∶1將血液稀釋,然后重層于菲可液面上,以1 500r/min離心30min,取白細(xì)胞層,用RPMI1640洗2次,按1~3×10細(xì)胞/ml濃度加入10%胎牛血清RPMI1640,注入一裝有磁棒的大瓶中,置37℃攪拌培養(yǎng)4天,取出,分裝于50ml離心管中,1 500r/min離心20min,棄上清液,將細(xì)胞懸浮于1%胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)液中,使細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/ml。同時加入純質(zhì)PHA1~2μg/ml以及多種B淋巴母細(xì)胞株,使其濃度為106細(xì)胞/ml,37℃攪拌培養(yǎng)18~24h后,取出以1500r/min離心30min,取上清,用045μg濾膜過濾除菌,濾液即為粗制IL-2。
2 制備精品IL2
2.1 硫酸銨沉淀與真空濃縮透析:在4℃下將硫酸銨粉末按50%飽和量加入上述粗制IL-2中,攪拌2h,12000g離心30min,取上清液,再加入80%飽和硫酸銨,4℃過夜,次日以12000g離心30min,棄上清液,將沉淀溶于1% PEG 6 000的1∶2 PBS溶液(pH值73)中,置真空負(fù)壓濃縮*中透析濃縮至所需容量。
2.2 Sephadex G100凝膠過濾:用2×180cm的過濾柱及PBS(同上),以80ml/h流速過濾。將各管洗脫液用紫外分光光度計280nm檢測其OD值。同時將幾種不同分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白也用相同條件過濾及檢測其OD值,繪出IL-2及標(biāo)準(zhǔn)蛋白OD值的曲線。將各管洗脫液過濾除菌后,作白細(xì)胞生物活性試驗,按試驗結(jié)果繪出曲線,找出具有zui高IL2活性的幾管洗脫液,混合后,作下一步精制。
2.3 BlueSepharose層析:將上述混合后的洗脫液加入BlueSepharose柱中,流速約15ml/h,按每管10ml收集流出液,當(dāng)樣品全部流出柱中以后,用上述PBS洗滌樣品柱,再用梯度NaCl溶液(從0075mol/L至06mol/L NaCl的PBS溶液)洗脫,按2ml/管收集洗脫液。NaCl 溶液梯度及流速均由梯度混合器調(diào)節(jié)控制。洗脫完畢后,作各管OD值及NaCl濃度的測定。各管洗脫液過濾除菌后,作出生物活性測定。將峰值前后的數(shù)管洗脫液混合,即為精制的IL2。置-20℃冰箱保存。
3 檢定
3.1 活性測定用10%胎牛血清RPMI1640將上述IL2稀釋為50%、25%、125%、625%,而后再將每個百分濃度以及100%濃度的IL2倍比稀釋,自1∶2至1∶128,將每個稀釋度分別加入多孔板的孔中,每孔01ml。然后取CT6細(xì)胞株(小鼠的IL2依賴性T細(xì)胞株),調(diào)整濃度為106細(xì)胞/ml,每孔加入01ml,同時用培養(yǎng)基代替IL2作對照。將多孔板培養(yǎng)24h后,取出按每孔1μci的濃度加H3標(biāo)記胸腺嘧啶核苷繼續(xù)培養(yǎng)4h。取出后用MESHⅡ細(xì)胞收集器過濾洗滌細(xì)胞,用β計數(shù)器測定各孔細(xì)胞的cpm。必要時按此結(jié)果繪出曲線,確定活性單位。
3.2 蛋白含量測定采用分光光度計,分別測得OD280及OD260,然后按下式計算:蛋白含量(mg/ml)=(144×OD280-075×OD260)×稀釋倍數(shù)
3.3 毒性試驗及細(xì)菌檢查參考*制備部分。
應(yīng)用
【藥理作用】 本品可促進T淋巴細(xì)胞增殖與分化,誘導(dǎo)具有細(xì)胞毒樣活力的殺傷細(xì)胞,誘導(dǎo)及增強殺傷性T細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的活力等。
【臨床應(yīng)用】 適用于慢性活動性乙型肝炎病毒感染等
【用法用量】 靜脈滴注:每次2.5萬-5萬U,每日1次。
【不良反應(yīng)】 常見發(fā)熱、寒戰(zhàn)等反應(yīng)。1.消化系統(tǒng):惡心、嘔吐、腹瀉、結(jié)腸局部壞死或穿孔。 2.呼吸系統(tǒng):可致間質(zhì)性肺水腫、呼吸性堿中毒。3.神經(jīng)系統(tǒng):可發(fā)生行為變化、認(rèn)知障礙。4.心血管系統(tǒng):可出現(xiàn)低血壓、心動過速、心律失常等癥狀。5.血液系統(tǒng):可出現(xiàn)中性粒細(xì)胞上升,淋巴及單核細(xì)胞下降。6.泌尿系統(tǒng):出現(xiàn)少尿、體液潴留、氨質(zhì)血癥。可出現(xiàn)內(nèi)分泌功能紊亂,血鈣、血磷下降,*缺乏。
【規(guī)格】 粉針劑:1000u,10000u, 10萬u, 100萬u.
注意事項:癲癇、嚴(yán)重低血壓,心、腎功能不全,高熱者禁用。孕婦、患有心臟病或肺部疾病、60歲以上者慎用。用藥期間應(yīng)定期查肝、腎功能。
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