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江萊生物-中國老牌試劑供應(yīng)商

細(xì)胞樣本的前處理

時(shí)間:2015-9-14閱讀:152
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一、勻漿介質(zhì)

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測(cè)定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。

二、細(xì)胞樣本的前處理:

1、細(xì)胞沉淀的收集:

① 懸浮細(xì)胞: 對(duì)于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,直接通過離心收集細(xì)胞沉淀,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細(xì)胞沉淀。

② 貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,用*將細(xì)胞消化下來,或用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細(xì)胞沉淀。

我們一般建議客戶,細(xì)胞密度不要小于一百萬個(gè)/ml。

2、細(xì)胞沉淀的洗滌:

在細(xì)胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS (等滲), 輕輕顛倒混勻,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,棄上清留細(xì)胞沉淀。

重復(fù)上述操作反復(fù)洗滌1~2次。

3、勻漿的方式:手工勻漿,超聲破碎,裂解液裂解,反復(fù)凍融。

① 手工勻漿:在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml),混勻,將細(xì)胞懸浮于PBS中,用移液器將細(xì)胞懸浮液移至玻璃勻漿管中(2ml玻璃勻漿管),將玻璃勻漿管置于冰水混合物中,手動(dòng)勻漿3分鐘,然后取破碎好的細(xì)胞懸浮液進(jìn)行測(cè)定。

② 超聲破碎:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml),混勻,將細(xì)胞懸浮于PBS中,在冰水浴條件下進(jìn)行如下操作:

     a、用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎,也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀,用400安培,5秒/次,間隙10秒反復(fù)3~5次。

      b、用超聲細(xì)胞破碎儀,300W功率,每次超聲3~5秒,間隔30秒,重復(fù)4~5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDS、NP-40TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的,或者說作用力量強(qiáng)弱不同。

1、SDS屬于離子型去垢劑,zui厲害,基本可以把細(xì)胞*破掉,DNA會(huì)釋放出來,裂解液變得很粘稠。

2、NP-40是很溫和的去垢劑,1%濃度的基本可以破壞掉胞膜,而對(duì)核膜破壞的作用弱,結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間,偏向于NP40,也是常用的細(xì)胞裂解液成分之一,在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用(SDS基本會(huì)使蛋白變性失活)。

去垢劑屬性只是一方面,buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關(guān)鍵因素

由于很多裂解液都是蛋白變性劑,對(duì)酶活力的測(cè)定有一定的影響,一般不*用裂解液進(jìn)行裂解。

④ 反復(fù)凍融:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml),混勻,將細(xì)胞懸浮于PBS中,放低溫冰箱中結(jié)冰,溶解,再結(jié)冰,再溶解,反復(fù)3次左右)。

                由于反復(fù)凍融對(duì)酶活力影響較大,一般不*使用


產(chǎn)品:

川烏對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
青皮對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:73069-13-3,白術(shù)內(nèi)酯 I標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
β-倒捻子素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:20931-37-7對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
蓖麻子對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
水翁花對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:38963-94-9,覆盆子酮葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
紫河車對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:1836-77-7,草枯醚標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
Melicopine標(biāo)準(zhǔn)品,cas:568-01-4對(duì)照品
牛黃對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
白花前胡乙素標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
鹽酸*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
補(bǔ)骨脂定標(biāo)準(zhǔn)品,cas:18642-23-4對(duì)照品
4-羥基苯甲酸對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
細(xì)辛脂素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:133-04-0對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
氫化肉桂醇標(biāo)準(zhǔn)品,cas:122-97-4對(duì)照品
瓦松對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
鹽酸*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
原花青素C標(biāo)準(zhǔn)品,cas:65085-09-8對(duì)照品
老蛇蓮對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:63492-69-3,紫草氰苷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:757202-06-5,林澤蘭內(nèi)酯 A標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:7440-55-3,鎵標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
小薊對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
嘧菌環(huán)胺標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品
(+)-沒食子兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:970-73-0對(duì)照品
苯甲醛標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
鹽酸*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
十七碳酸甲酯對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
美雄諾龍對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:27975-19-5,異甜菊醇標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
白花前胡素E標(biāo)準(zhǔn)品,cas:78478-28-1對(duì)照品
水翁花對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
大黃酸標(biāo)準(zhǔn)品,cas:478-43-3對(duì)照品
*B對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
氯吡脲標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:68157-60-8
CAS:66663-90-9,桔梗皂苷D2標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
二氯甲烷對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:34883-41-5,3,5-二氯聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
華蟾酥毒基對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
麥角甾醇對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
牛白藤對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
小檗皮對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
惡唑磷標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:18854-01-8
甲霜靈標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:57837-19-1
分散藍(lán)35標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:12222-75-2
硫酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:633-66-9對(duì)照品
浮萍對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
呋喃丙胺雜質(zhì)A對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:2602-46-2,直接藍(lán)6標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
環(huán)維黃楊星D對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
熟地黃標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:10004-44-1,惡霉靈標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
乳氟禾草靈標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:77501-63-4
野漆樹苷標(biāo)準(zhǔn)品,cas:17306-46-6對(duì)照品
鹽酸*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
乙醇標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
人參皂苷Rf對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
烏梅對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
舒巴坦對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:545-47-1,羽扇豆醇標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:477-84-9,丹寧卡標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
*系統(tǒng)適用性對(duì)照品對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
羥苯甲酯(對(duì)羥基苯甲酸甲酯)標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
脫水差向四環(huán)素對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
甲基硫菌靈標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格
遠(yuǎn)華蟾毒精標(biāo)準(zhǔn)品,cas:472-26-4對(duì)照品
苯對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品
CAS:2035-15-6,高麗槐素標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
地*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
沙門、志賀菌屬瓊脂(SS)對(duì)照培養(yǎng)基
CAS:55750-84-0,西紅花苷 II標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
*堿標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
CAS:589-68-4,1-肉豆蔻酸單甘油酯標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
乙酰蝙蝠葛蘇林堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:132139-17-4對(duì)照品

ight:14.25pt;width:303.00pt;">CAS:20183-47-5,細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品 6,7-二甲氧基香豆素標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品    

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