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上海紀寧實業(yè)有限公司

ELISA試劑盒制備要求

時間:2015-8-28閱讀:881
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ELSA試劑盒在歐美及中國獲得很大的推廣,尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展,得到*科研工作者的認可及推崇。

ELISA試劑盒是由以下部分組成的:
1、已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);
2、酶標記的抗原或抗體(結(jié)合物);
3、結(jié)合物及標本的稀釋液;
4、酶的底物;
5、洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
6、陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中);
7、酶反應(yīng)終止液,常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液的zui終體積而異,在板式ELISA中一般采用2mol/L。

注: 
1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。 
2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結(jié)合物或底物時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推選使用多道移液器加樣。 
3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應(yīng)嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。 
4. 洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標儀讀數(shù)。 
5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。 
6. 反應(yīng)時間的控制:加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。 
7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。 
建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準確性。 
如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。 

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