免疫測(cè)定技能的根底在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反響，所以任何的診斷試劑離不開(kāi)的質(zhì)料，如抗原抗體，酶等。曾經(jīng)用于免疫測(cè)定的抗原一般為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后取得的多克隆抗體和運(yùn)用雜交瘤技能得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的符號(hào)物如酶標(biāo)結(jié)合物則經(jīng)過(guò)各種化學(xué)合成辦法制備。近年來(lái)，跟著分子生物學(xué)的發(fā)展，運(yùn)用基因工程辦法制備各種特別的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑，各種新型運(yùn)用的測(cè)定辦法也不斷出現(xiàn)。
包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)刻及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，調(diào)查陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。挑選OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。關(guān)于大都蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)一般為1～10μg/ml。
 酶符號(hào)抗體工作濃度的挑選：首先用直接ELISA法進(jìn)行開(kāi)始效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶符號(hào)抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號(hào)抗體分別為不同的稀釋度）在正式試驗(yàn)體系里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
酶的底物及供氫體的挑選：對(duì)供氫體的挑選要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反響，而自身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌效果，應(yīng)留意防護(hù)。有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿意的供氫體。底物效果一段時(shí)刻后，應(yīng)參加強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反響。一般底物效果時(shí)刻，以10-30分鐘為宜。底物運(yùn)用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前參加。