如果您一直被背景問題所困擾，那么也許您該花些時間來優(yōu)化封閉液。這可能需要時間，但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。如應(yīng)用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則在測定時可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應(yīng)時間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測定抗原的elisa試劑盒提高到新水平。

  上海豐壽在一步法測定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)（hookeffect），類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測抗原濃度相當(dāng)高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

（三）間接法測抗體

間接法是檢測抗體*常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。ELISA試劑盒操作步驟如下：

（1）將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。

（2）加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合，在洗滌過程中被洗去。

（3）加酶標(biāo)抗抗體：與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合，從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，ELISA試劑盒可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。

（4）加底物顯色：顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。

本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測各種與抗原相應(yīng)的抗體。
用戶選用試劑盒，主要是為了及時得到可靠的數(shù)據(jù)。因此，試劑盒實用性是用戶選購試劑盒的考慮。從實用的角度來看，豐壽牌試劑盒必須滿足下述要求。
 
（1）質(zhì)量可靠。在研發(fā)過程中選擇測定方法，反復(fù)優(yōu)化測定體系、測定條件和操作步驟，并且進(jìn)行多種生物樣品的實際測定驗證，以確保測定的專一性、靈敏度、重復(fù)性和回收率；在生產(chǎn)過程中實行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，主要試劑選擇國外生產(chǎn)商，并且從固定供應(yīng)商處購買，生產(chǎn)人員經(jīng)過系統(tǒng)經(jīng)久培訓(xùn)，并且建立了嚴(yán)格的質(zhì)量追溯體系。豐壽生物實行先用后付方法，即用戶滿意后才付款。萬一出現(xiàn)質(zhì)量問題，豐壽生物及時免費提供新試劑盒。
 
（2）操作簡便快捷。首先，測定方法以分光光度法為主，并且可以用酶標(biāo)儀測定，保證絕大多數(shù)用戶都有相應(yīng)的儀器和操作經(jīng)驗。其次，保證測定結(jié)果可靠的基礎(chǔ)上科學(xué)簡化操作步驟，例如，根據(jù)反應(yīng)步驟配制工作液，顯著減少了用戶加液次數(shù)，盡量統(tǒng)一加試劑的體積，顯著減少用戶調(diào)移液器的次數(shù)等等。*后，操作說明簡潔明確，用戶一看就懂。
 
（3）規(guī)格合理。試劑盒中通常由必須現(xiàn)用現(xiàn)配的試劑。如果保證過大，用戶一天內(nèi)不能用完，會造成試劑浪費。因此，常量法豐壽牌試劑盒以50T/48S規(guī)格為主，絕大多數(shù)用戶能夠一天內(nèi)用完。微量法大規(guī)格包裝可以節(jié)省用戶經(jīng)費。因此，豐壽牌試劑盒也有大包裝試劑盒，其中需要現(xiàn)用現(xiàn)配的試劑，采用分裝成幾個試劑瓶的方法，方便用戶分次使用。
 
（4）系列成套，便于用戶選擇。豐壽生物緊跟研究熱點，針對某個研究主題，優(yōu)選測定指標(biāo)，全面滿足用戶進(jìn)行該主題研究的需要。