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上海紀寧實業(yè)有限公司

上海紀寧生物代做免疫組化實驗

時間:2020-3-17閱讀:1267
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免疫組化代測,免疫組化試劑盒,免疫組化是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(shù)(immunocytochemistry)。

免疫組化(LP 法)操作步驟:
1.切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復,可在此步后進行
⒉ 緩沖液洗 3min/2 次。
⒊ 為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
⒋ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。(注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)
⒍ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者*終決定)

免疫組化試劑盒實驗代測的操作方法
⒏ 緩沖液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增強子),在室溫下孵育 20 分鐘。
10 .緩沖液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer(酶標二抗) ,在室溫下孵育 30 分鐘。(注:HRP Polymer 對光敏感,應避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。)
12 .緩沖液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen),混勻后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)
14 .自來水充分沖洗,復染,脫水,透明,封片。

免疫組化染色步驟
冰凍切片 4-8um ,室溫放置 30 分鐘后,入 4 ℃丙酮固定 10分鐘,PBS洗,5分鐘x3,用過氧化氫孵育5-10分鐘,消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。

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