乙醛酸循環(huán)系列_蘋(píng)果酸合酶(MS)測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
蘋(píng)果酸合酶（MS，EC 4.1.3.2）是屬于轉(zhuǎn)移酶中?；D(zhuǎn)移酶的一類(lèi)，主要存在于植物和微生物中。MS 是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，在 MS 催化下乙醛酸與乙酰輔酶 A 反應(yīng)生成蘋(píng)果酸。
測(cè)定原理：
MS 催化乙酰 CoA 和乙醛酸產(chǎn)生蘋(píng)果酸，同時(shí)生成輔酶 A，輔酶 A 使無(wú)色的 DTNB 轉(zhuǎn)變成的 TNB，在 412nm 處有特征吸光值。
需自備的儀器和用品：
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、冰、和蒸餾水
乙醛酸循環(huán)系列_蘋(píng)果酸合酶(MS)測(cè)試盒
試劑組成和配制：
試劑一：液體 120 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 10 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存；臨用前加入 10mL 試劑一充分溶解后使用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 2.4mL 試劑一充分溶解后使用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；
樣本的前處理：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱(chēng)取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 412nm。
2、樣本測(cè)定
在96 孔板中依次加入 20μL 樣本、80μL 試劑二，80μL 試劑三和 20μL 試劑四，混勻，立即記錄 412 nm 處反應(yīng) 5min 時(shí)的吸光值 A1 和 10min 時(shí)的吸光值 A2，計(jì)算 ΔA=A2-A1。
環(huán)保在線