糖代謝系列_山梨-醇脫氫酶(SH)測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
SH（EC 1.1.1.14）催化山梨-醇脫氫生成果糖，是調(diào)控生物體內(nèi)山梨-醇含量的關(guān)健酶之一。
糖代謝系列_山梨-醇脫氫酶(SH)測(cè)試盒
測(cè)定原理：
SH催化山梨-醇脫氫生成果糖，同時(shí)還原NAD+生成NADH，測(cè)定340nm吸光度增加速率可以計(jì)算SH活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；
粗酶液提?。?/p>
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定
（1）在試劑二中加入7.6mL試劑一和11.4mL蒸餾水充分溶解，置于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴5min；用不完的試劑4℃保存一周；
（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑二，混勻，立即記錄340nm處20s時(shí)的吸光值A(chǔ)1和 2min20s后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
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