轉(zhuǎn)氫酶-1測試盒 _氧化磷酸化系列
測定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意 ：正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
TH位于線粒體的內(nèi)膜上，又稱為呼吸電子傳遞鏈復(fù)合體六，催化NADH+NADP+和 NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化。催化正向反應(yīng)稱為TH-1。線粒體NADH含量增加時會導(dǎo)致線粒體膜的H+電化學(xué)梯度升高，因而促進(jìn)了電子傳遞鏈上ROS的產(chǎn)生。TH-1促進(jìn)NADH轉(zhuǎn)換為NADPH，從而提高線粒體的抗氧化能力。
轉(zhuǎn)氫酶-1測試盒 _氧化磷酸化系列
測定原理：
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸（APADP+）替代NADP+，TH-1催化 APADP+還原生成的APADPH在375nm有特征光吸收，因此通過測定375nm光吸收增加速率，來計(jì)算TH-1活性。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：液體25mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：液體25mL×2瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×2支，-20℃保存；
試劑五：粉劑×2支，-20℃保存；
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
①準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)菌或細(xì)胞，加入1mL試劑一，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g，4℃離心5min。
③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
④上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的TH-1（此步可選做）。
⑤步驟④中的沉淀即為線粒體，加入500uL試劑二，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復(fù)30次），用于TH-1活性測定。
測定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至375nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
（1）工作液的配制：臨用前取試劑三、試劑四和試劑五各一支，將試劑四、五轉(zhuǎn)移到試劑三中混合溶解，置于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴5min；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
（2）在1mL玻璃比色皿中加入100μL樣本和1000μL工作液，混勻，立即記錄375nm處初始吸光值A(chǔ)1
和 10min后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
環(huán)保在線