氮代謝系列_谷-氨酰胺酶(GLS)測(cè)試盒
測(cè)定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
GLS(EC 3.5.1.1)是酰胺基水解酶,催化天冬酰胺水解成谷-氨酸和氨,在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用,尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。
氮代謝系列_谷-氨酰胺酶(GLS)測(cè)試盒
測(cè)定原理:
GLS催化谷-氨酰胺水解成L-谷-氨酸和氨,利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率,即可計(jì)算其酶活性。
需自備儀器和用品:
臺(tái)式離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽、冰和雙蒸水。
試劑組成和配制:
試劑一×2瓶,60 mL,4 ℃保存;
試劑二×1瓶,40 mL,4 ℃保存;
試劑三×1瓶,60 mL,常溫保存;
試劑四×1瓶,5 mL,常溫保存;
試劑五×1瓶,3 mL,常溫保存;
試劑六×1瓶,3 mL,常溫避光保存。
粗酶液提取:
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。