丙酮酸脫氫酶(PDH)測(cè)試盒_三羧酸循環(huán)系列
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
PDH（EC 1.2.4.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶，催化丙酮酸脫梭生成-TPP，把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來(lái)。
丙酮酸脫氫酶(PDH)測(cè)試盒_三羧酸循環(huán)系列
測(cè)定原理：
PDH催化丙酮酸脫氫，同時(shí)還原2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），從而導(dǎo)致600nm光吸收的減少。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：50mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：10mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：1mL×1支，-20℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶，4℃保存；
試劑五：粉劑×1支，4℃保存；
試劑六：粉劑×1支，4℃保存；
試劑七：粉劑×1支，4℃保存；
試劑八：粉劑×1支，4℃保存;
工作液的配制：臨用前把試劑五、試劑六、試劑七和試劑八轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、稱取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g，4℃離心5min。
3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
4、上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的PDH（此步可選做）。
5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），用于線粒體PDH活性測(cè)定。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至605nm處，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）中孵育5min。
3、在1mL玻璃比色皿中加入50μL樣本和900μL工作液，混勻，立即記錄605nm處初始吸光值A(chǔ)1和1min后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
環(huán)保在線