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鴨ELISA試劑實驗的步驟

閱讀:90發(fā)布時間:2015-5-11


鴨病毒性腸炎(DVE),又名鴨瘟(DP)是由鴨病毒性腸炎病毒(DEV)引起的鴨、鵝及多種雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病。傳播迅速,發(fā)病率和死亡率都很高,給我國養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。在鴨病毒性腸炎的免疫預(yù)防工作中,接種了鴨病毒性腸炎疫苗后,由于多種因素可能導(dǎo)致免疫鴨不產(chǎn)生或產(chǎn)生低水平鴨病毒性腸炎病毒抗體。
B蛋白是病毒的囊膜蛋白,具有吸附、穿入、融合細(xì)胞以及細(xì)胞間傳播功能,具有良好的反應(yīng)原性及免疫原性,誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高水平的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測鴨血清中抗鴨病毒性腸炎病毒gB蛋白抗體IgG。用于免疫鴨病毒性腸炎疫苗后的抗體動態(tài)水平監(jiān)測,指導(dǎo)免疫預(yù)防工作,評估鴨病毒性腸炎免疫狀況,也可用于該病的流行病學(xué)調(diào)查。


需要自備的器材;微量移液器,微量移液器配套使用的槍頭,用來稀釋洗滌液的500ml量筒,適用于檢測96T微孔板的酶標(biāo)儀,用于稀釋樣品的1.5ml Ep管,蒸餾水或去離子水。 樣品的制備;用樣品稀釋液將待檢血清樣品進(jìn)行100倍稀釋(建議:2μl血清樣品加入198μl樣品稀釋液中),樣品加入包被板前要充分混勻,稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。注意:①制備血清用的血液樣本應(yīng)無溶血現(xiàn)象發(fā)生;②不能稀釋陰性、陽性對照。
操作步驟;在A1和A2孔中分別加入100μl陰性對照;在A3和A4孔中分別加入100μl陽性對照;取100μl經(jīng)1:100稀釋好的待檢樣品加入相應(yīng)孔中,并做好記錄;37℃孵育1h;將各孔的液體棄入廢液桶,每孔加250μl的洗滌液(試劑盒內(nèi)20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋后方可使用。如有結(jié)晶,需先溶解后,方可進(jìn)行稀釋)進(jìn)行洗板,重復(fù)5次,每次30s;加液時防止各孔間洗滌液串流影響檢測結(jié)果,盡量將孔內(nèi)洗滌液拋甩干凈;每孔加100μl酶標(biāo)結(jié)合物;37℃孵育1h;重復(fù)步驟3.5;每孔加100μl底物液;37℃孵育10min(避光顯色);每孔加100μl的終止液;立刻于450nm波長處測定各孔的吸光度值,即OD450值。


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