豬熱休克蛋白40(HSP-40)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理：
用純化的MT抗體包被微孔板，制成固相載體，往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的MT抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物（TMB）顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的MT呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品英文：PoFAine Heat Shock Protein 40,HSP-40 elisa Kit
產(chǎn)品用途：僅供科研使用
檢測(cè)范圍：15.6 pg/ml - 1,000 pg/ml
特 異 性：本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)
豬熱休克蛋白40(HSP-40)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)意事項(xiàng)
1.血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存，應(yīng)在-70℃以下。
2.在使用微量加樣器時(shí)，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3.吸取液體時(shí)速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
4.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長(zhǎng)，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶，如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。1．5 吸取液體時(shí)要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。
5.液體全部加入酶標(biāo)孔后，將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng)。
6.孵育時(shí)要使蓋板膜封好酶標(biāo)板，防止水分蒸發(fā)，以防曲線不成線性。
7.實(shí)驗(yàn)前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標(biāo)板只要取出所需量。
8.由于底物顯色劑對(duì)光及其敏感，因此要避光保存。
要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色
9.手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
10.檢測(cè)吸光度前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開，將其預(yù)熱30min以上。
11.底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃**具有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
12.孵育的時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格按照試劑盒說明書上的時(shí)間為準(zhǔn)。
13.要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。
14.冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。
15.對(duì)樣本的結(jié)果有疑問時(shí)需要使用其他檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證。
16.沒有去離子水或雙蒸水時(shí)，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。
17.標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。
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