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培養(yǎng)基是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。培養(yǎng)基一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。然而在開始進行新的細胞培養(yǎng)時,需要消除組織培養(yǎng)的污染,其步驟如下:
① 在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞,稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。
② 分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。
③ 每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。
④ 確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2-3代。
⑤ 在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。
⑥ 重復步驟4。
⑦ 在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,確定污染是否以已被消除。
在進行新的細胞培養(yǎng)時,必須先消除組織培養(yǎng)的污染, 這樣才不會影響實驗的效果。
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