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血清培養(yǎng)基主要問題
1. 血清的成份可能有幾百種之多,目前對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難。
2. 血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標準化和連續(xù)性受到限制。
3. 對大多數(shù)細胞,在體內(nèi)狀態(tài),血清不是它們接觸的生理學(xué)液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內(nèi)的正常狀態(tài),血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時抑制另一類細胞生長(表皮細胞)。
4. 血清含一些對細胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、細菌毒素等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡。
5. 動物個體不同,血清產(chǎn)地、批號不同,每批質(zhì)量差異甚大,其成分不能保持一致。
6. 取材中可能帶入支原體、病毒,對細胞產(chǎn)生潛在影響,可能導(dǎo)致實驗失敗或?qū)嶒灲Y(jié)果不可靠性。
7. 大規(guī)模生產(chǎn)中,血清來源越來越困難,價格昂貴,是構(gòu)成動物細胞培養(yǎng)對生產(chǎn)成本的主要部分之一。
血清的質(zhì)量標準
血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過程。用于取材的動物應(yīng)健康無病并且在的出生天數(shù)之內(nèi),取材過程應(yīng)嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行,制備出的血清要經(jīng)過嚴格的質(zhì)量鑒定。WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求:
1. 牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應(yīng)具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。
2. 有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。
3. 證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。
4. 血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。
5. 無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。
6. 對細胞有良好的支持繁殖作用。
我國在對牛血清的質(zhì)量《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標準》中提出比較嚴格的標準要求。包括蛋白質(zhì)含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內(nèi)毒素,支持細胞增殖檢查。
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