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ELISA實(shí)驗(yàn)操作之點(diǎn)板、洗板、甩板、拍板、顯色之操作

時(shí)間:2015-7-2閱讀:723
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一、點(diǎn)板

加樣過程中的注意事項(xiàng)
加樣的過程中漏加或者重加; 
加樣的過程中忘記更換吸頭; 
樣本的重加或者漏加; 
忘記記錄樣本的加樣順序
加樣應(yīng)用微量移液器(加樣*)按規(guī)定的量加入微孔板的1/3處避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。

在實(shí)際點(diǎn)樣過程中,提倡用重復(fù)移液法",用這種方式,有如下幾種好處
加樣過程中在板空內(nèi)不出現(xiàn)或者很少出現(xiàn)氣泡
提高加樣速度,縮短前后樣本反應(yīng)的時(shí)間差

常見的洗板方式 
洗板機(jī)洗板; 
多道孔加樣器洗板 
多孔吸頭洗板 
   在洗板的過程中,確保每孔所加洗滌液量的均一,按說明書操作,不可過多,避免溢出板孔,污染其它樣本,過少,則達(dá)不到洗滌的效果,容易出現(xiàn)曲線不成線性,花板等情況。
 二、洗板:

洗板機(jī)洗板 
   洗板機(jī)洗板一定要預(yù)先把板架放平,使洗板機(jī)上的每個(gè)放液和吸液纖孔都能一致地插入孔底,將孔內(nèi)液體全部吸干,同時(shí)要設(shè)置一定的浸泡時(shí)間。如出現(xiàn)機(jī)洗后拍板有較多殘留液時(shí)應(yīng)再用手工洗2次以上。關(guān)機(jī)前要用蒸溜水沖洗管道,避免堵孔 
手工洗滌 
   手工洗滌一般采用多道孔加樣器進(jìn)行洗板,注意要*行吸頭的篩選,防止出現(xiàn)*頭安放不牢的現(xiàn)象。

      ELISA是靠洗滌來達(dá)到分離結(jié)合與未結(jié)合抗原抗體復(fù)合物及酶標(biāo)記物的目的,同時(shí)洗滌也可將非特異吸附的干擾物質(zhì)清除掉。

三、甩板
快速甩盡板孔內(nèi)的液體。防止板孔里的液體對(duì)流或反濺回板孔中產(chǎn)生交叉污染。

四、拍板 
輕輕的在吸水紙上扣干板孔內(nèi)的液體,而且吸水紙只能使用一次

五、顯色 
值得注意的是,并非試劑盒中所規(guī)定的顯色時(shí)間是的,因?yàn)樵噭┖械奈舛戎禃?huì)受環(huán)境中的溫度、濕度、酶標(biāo)板反應(yīng)時(shí)所接觸到的物品的導(dǎo)熱度等有關(guān),實(shí)驗(yàn)操作人員在加完顯色液后,可根據(jù)顏色的深淺適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)或者縮短顯色時(shí)間。防止出現(xiàn)吸光值接近或高于酶標(biāo)儀的zui高檢測(cè)靈敏度(OD值在2.5-3.0之間),這樣會(huì)間接影響到檢測(cè)結(jié)果,如出現(xiàn)曲線前半部份梯度不明顯或顛倒數(shù)值等現(xiàn)象,也就造成了一些假陽性或部份檢測(cè)結(jié)果偏低的現(xiàn)象。


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