雙縮脲法蛋白質(zhì)含量測定試劑盒說明書
測定意義
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測定原理
強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲于SuSO4形成紫色絡(luò)合物：紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān)，故可用來測定蛋白質(zhì)含量。該方法測定范圍為1～10mg蛋白質(zhì)，適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品，尤其是動(dòng)物材料。
自備一起和用品
可見分光光度計(jì)、移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制
試劑一：液體×1 瓶 4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 瓶，5 mg/mL，4℃保存。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取
1、液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。
2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1:5～10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測夜。（動(dòng)物樣品常常需要稀釋）。
3、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500～1000:1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）：然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
測定
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、空白管：取1mL玻璃比色皿，加入200uL蒸餾水，1000uL試劑一，混勻后室溫靜置15min，于540nm比色，記為A空白管。
3、標(biāo)準(zhǔn)管：取1mL玻璃比色皿，加入200uL標(biāo)準(zhǔn)液，1000uL試劑一，混勻后室溫靜置150min，于540nm比色，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
4、測定管：去1mL玻璃比色皿，加入200uL待測夜，1000試劑一，混勻后室溫靜置15min，于540nm比色，記為A測定管。
樣品中蛋白質(zhì)濃度計(jì)算
C待測（mg/mL）= C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測定管- A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)=5×(A測定管- A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)
注意事項(xiàng)：
1、樣品蛋白濃度須在 1～10mg/ml范圍內(nèi)低于1mg/ml能用法高于10mg/ml須做相應(yīng)稀釋因測定前用1～2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)確保蛋白濃度在1～10mg/ml范圍內(nèi)
2、待測樣品蛋白提可用生理鹽水、雙蒸水或含蛋白的 PBS 提該法硫酸Tris 緩沖液干擾提液中應(yīng)含這些物質(zhì)否則改用 BCA 蛋白質(zhì)含測定試劑盒
會(huì)員1.png)