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濾片

閱讀:128發(fā)布時(shí)間:2016-7-14

濾片

 

    流式細(xì)胞術(shù)中所用濾片有很多中,有中性濾片、帶通、帶阻、長波通,短波通、長波通二色性反射片等。中性無頻率特性,它對各波長的光線均勻哀減,常用在光線過強(qiáng)需要均勻哀減的地方。帶阻是濾除某一特定波長的光線,高于或低于此譜線的光不受影響。帶通的作用則正好相反,它只允許某一特定波長的光線通過,例如一個(gè)525nm帶通只允許FITC發(fā)射的525nm綠色熒光通過,而其他波長的熒光全部被阻斷。長波通只允許某一波長以上的光線通過而將此波長以下的光線濾掉,如620nm長波通只允許PI發(fā)射的紅色熒光通過,而488nm的激發(fā)光及FITC發(fā)射的525nm綠光全部被阻。長波通二色性反射鏡只允許某一波長以上的光線通過而將此波長以下的另一特定波長的光線反射。例如讓620nm以上的紅光通過而將525nm綠光反射,其他的光線則由鏡片吸收。這種二色性反射鏡有一定使用壽命,使用時(shí)需注意。

的用途大體上有二:

(1)、激發(fā)光波長應(yīng)盡可能接近熒光染料的激發(fā)光譜峰值。當(dāng)光源使用激光器時(shí),可調(diào)節(jié)激光的波長選擇器選擇波長;但當(dāng)光源是汞燈或其他廣譜光源時(shí)就要在激發(fā)光源前加來選擇激發(fā)光的波長。

(2)、檢測器應(yīng)檢測盡可能純的和強(qiáng)的發(fā)射熒光。由于細(xì)胞在發(fā)射熒光的同時(shí)也有散射光,必須防止這部分散射光與熒光一起混入熒光探測器。另外,在多種熒光同時(shí)檢測時(shí),每個(gè)熒光檢測器應(yīng)只檢測一種染料發(fā)射的特定熒光,這時(shí)就要用系統(tǒng)阻擋住散射光,而對每個(gè)檢測器只允許一種波長的熒光信號進(jìn)入而被檢測。選擇系統(tǒng)的依據(jù)就是要了解熒光染料的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。當(dāng)用來探測兩種以上波長的熒光時(shí),為了有效地使各種熒光分開,可采用二色性反射鏡。


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