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染色體懸浮液的制備

閱讀：129發(fā)布時(shí)間：2016-7-27

染色體懸浮液的制備

     將染色體分散在懸浮液中，用熒光染料對(duì)DNA進(jìn)行染色后，以流式細(xì)胞計(jì)定量分析染色體的DNA分布，這種方法稱為流式核型分析。流式核型分析成為常規(guī)核型和帶型分析的重要輔助手段。流式分類得到的某種單純的染色體，可建立染色體DNA文庫(kù)。所以，制備染色體的懸浮液也是流式細(xì)胞中一個(gè)重要的研究系統(tǒng)。這里介紹一個(gè)染色體懸浮液的制備程序，供參考。

     首先收集有絲分裂中期細(xì)胞，以中國(guó)藏書卵巢細(xì)胞株（CHO細(xì)胞）為例。將CHO細(xì)胞培養(yǎng)在含10%小牛血清的MEM-Eagle’s培養(yǎng)液中，在對(duì)數(shù)生*，加入秋水胺（0.032ug/ml），5小時(shí)后用振蕩法收集有絲分裂中期細(xì)胞。然后將收集到的中期細(xì)胞懸浮在1.5ml碘化丙啶（PI）的低滲液中（內(nèi)含有0.075MKCI和50ug/ml PI，pH8.4),室溫下靜置10分鐘，再加入0.75ml含有Triton-X100的溶液（含0.075MKCI，0.1%Triton X-100和50ug/ml 的 PI）靜置3分鐘后，用26號(hào)針頭（相當(dāng)于我國(guó)4號(hào)）抽吸細(xì)胞懸浮液2—3次釋放染色體，并可在熒光顯微鏡下檢查染色體。


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