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凝血酶（Thrombin)的用途

時間：2024/1/23閱讀：469
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凝-血酶（Thrombin)的用途

 

簡介：凝-血酶（Thrombin）來源于牛血漿，分子量37KD，是由兩條肽鏈（31KD和6KD）通過二硫鍵組成的。凝-血酶是凝-血酶原（凝-血因子Ⅱ）激活后形成的蛋白質(zhì)水解酶，其催化纖維蛋白原（fibrinogen）水解掉A肽和B肽，由此形成纖維蛋白單體，單體進一步聚合。

由于凝-血酶具有切割序列專一性強，水解效率高的特點，它被廣泛地應用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā)，其應用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂，尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學、分子生物學等研究。

 

 

凝-血酶是一種廣泛用于切割標簽的蛋白酶，能夠有效切質(zhì)量比僅為1:2000的蛋白。建議消化緩沖液:20mMTris-HCl緩沖液，150mM NaCl，pH8.0，于20℃到37℃之間切割0.3到16小時,1U可切割約0.1-0.5mg蛋白。

 

凝-血酶最佳切割位點是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',這里X4和X3是疏水氨基酸而X1'和X2'是非酸性氨基酸，一些經(jīng)常使用的識別位點L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和M-Y-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之間切割比在4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他識別位點是X2-R[K]-X1',這里X2或者X1'是甘-氨酸，例如A-R-G和G-K-A，這里切割發(fā)生在第二個殘基后。在凝-血酶切割位點和N末端標簽之間插入五個甘-氨酸殘基可改善切，通過這一"甘-氨酸連接肽"只需較少酶量就可達到切割,而且也可以避免可能發(fā)生的錯誤切割。凝-血酶可從切割產(chǎn)物中用p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖移去。

 

牛凝-血酶（Thrombin）
來源：牛血漿
性狀：白色或微黃色凍干粉
規(guī)格：1000U/支
保存：凍干粉4-8℃保存1年
純度：SDS-PAGE電泳純度≥95%（無蛋白酶）
比活：≥2000U/mgpr

 

使用方法：生理鹽水溶解使用，復溶后-20度凍存，避免反復凍融

 

用途：凝-血酶時間檢測試劑（TT）配制、纖維蛋白原檢測試劑（FIB）配制、TB位點酶切、納豆激酶活力測定、尿-激酶活力測定等,非臨床治療使用。

 

凝-血酶（Thrombin)的用途

 

 

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