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補體3a(C3a)試劑盒*

時間:2017/9/6閱讀:1288
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丙二醛(MDA)試劑盒基本信息

丙二醛(MDA)是常用的膜脂過氧化指標,在酸性和高溫度條件下,可以與硫代酸(TBA)反應生成紅棕色的*川(3,5,5—*基惡唑-2,4。二酮),其zui大吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質的干擾,其中zui主要的是可溶性糖,糖與TBA顯色反應產(chǎn)物的zui大吸收波長在450nm,但532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加,因此測定植物組織中MDA—TBA反應物質含量時一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應物在532、450nm處的消光度值,所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應中需一定量的鐵離子,通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug·g-1,根據(jù)植物樣品量和提取液的體積,加入Fe3+的終濃度為0.5umol·L-1。

丙二醛(MDA)試劑盒檢測技術簡介

雙抗體夾心法

  1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

  3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

  5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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補體3a(C3a)試劑盒基本信息

補體(complement,C)是存在于正常人和動物血清與 組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質。早在19世紀末Bordet即證實,新鮮血液中含有一種不耐熱的成分,可輔助和補充特異性抗體,介導免疫溶菌、溶血作用,故稱為補體。補體是由30余種可溶性蛋白、膜結合性蛋白和補體受體組成的多分子系統(tǒng),故稱為補體系統(tǒng)(complement system)。根據(jù)補體系統(tǒng)各成分的生物學功能,可將其分為補體固有成分、補體調(diào)控成分和補體受體(CR)。

補體3a(C3a)試劑盒的顯色與比色

顯色

  顯色是ELISA試驗中zui后一步溫育反應,此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。適當提高溫度,有助于加速顯色。在一定時間內(nèi),陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。在定量檢測中,加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。ELISA顯色結果通過酶標儀進行,可減少實驗誤差,提高臨界值樣本的分析準確度。盡量避免肉眼直接判斷結果,因為不同個體的視覺存在差異。應注意,加顯色劑時,要保持顯色劑不外流。加終止液時應避免產(chǎn)生較多氣泡,否則可能使假陽性結果的出現(xiàn)概率增加。

比色

  比色的方法有目視法和酶標比色法2種。目視法簡單明了,但對同一標本,操作者的不同有時會出現(xiàn)不同的結果,具有一定的主觀性。比色的結果通常用光密度表達,現(xiàn)按規(guī)定用吸光度表達。酶標儀不應安置在陽光或強光照射下,操作時的適宜室溫在15℃~30℃之間,使用前要先預熱儀器15~30min,使測得結果更為準確。比色前,應先用潔凈的吸水紙擦拭干凈板底附著的液體,然后將板正確放在酶標比色儀的比色架上。綜上所述,的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。在實際應用過程中,操作者必須熟練掌握基本操作技能,對每個環(huán)節(jié)進行嚴格仔細的核查,盡量避免假陽性和假陰性反應的出現(xiàn),保證檢測結果真實可靠,為診斷和疾病防治提供可靠的理論依據(jù)。

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