HE染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)

蘇木精-伊紅染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，簡(jiǎn)稱HE染色法 ，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性 ，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色 ；伊紅為酸性染料 ，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。

HE染色使用說(shuō)明:

1、細(xì)胞可做HE染色，貼壁細(xì)胞做爬片后染色，懸浮細(xì)胞做滴片后染色。

2、拍照倍數(shù)分100倍，200倍，400倍。正常情況下拍照是200倍3張，400倍3張。

3、全景掃描可看任意倍數(shù)。

HE染色實(shí)驗(yàn)步驟

1、樣本組織固定與切片：首先將組織樣本進(jìn)行常規(guī)的石蠟包埋。在模具中加入液態(tài)石蠟，將待包埋的組織樣本放入石蠟中，確保組織位置規(guī)整。補(bǔ)充少許液態(tài)的石蠟后，進(jìn)行降溫冷凍，使石蠟變?yōu)楣虘B(tài)達(dá)到組織固定的效果，然后使用石蠟切片機(jī)進(jìn)行切片，厚度在４-８um左右。將切完后的組織切片放入載玻片上使用40℃溫水浸泡使組織充分伸展。

2、組織樣本脫蠟：將待測(cè)組織樣本切片放于二甲苯中，充分浸泡10min，浸泡完后更換二甲苯繼續(xù)浸泡10min，目的是使用二甲苯將切片中的石蠟溶解，這樣可以在進(jìn)行染液染色的時(shí)候，染液可以充分進(jìn)入組織種，同時(shí)，二甲苯還可以起到透明的作用，使切片更容易觀察。

3、組織樣本水化：將浸泡過(guò)二甲苯的待測(cè)組織樣本先放入無(wú)水乙醇中浸泡5min，使脫蠟時(shí)用的二甲苯可以被洗脫出去，使水可以進(jìn)入組織中；再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡５min以達(dá)到充分水化的效果。

4、組織切片蘇木素染色、分化與反藍(lán)：將水化后的組織樣本的切片使用PBS溶液浸泡清洗，每次浸泡５min，總共清洗３次。之后用移液槍吸取已經(jīng)預(yù)先配制好的蘇木素染色液，每個(gè)組織切片滴加100ul，充分染色10min。染色完畢后使用蒸餾水洗去多余的蘇木素染色液。然后再使用1%的鹽酸乙醇進(jìn)行分化，使細(xì)胞核中結(jié)合過(guò)多的染液和細(xì)胞漿中的多余的染液被除去。分化完成后，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。為了使蘇木素染藍(lán)色，使用弱堿性的促藍(lán)液加入組織切片中，讓細(xì)胞核染藍(lán)色。反藍(lán)結(jié)束后先用清水進(jìn)行清洗，再用雙蒸水將組織切片沖洗干凈。

5、組織切片伊紅染色與脫水：向上一步驟的組織樣本切片中加入伊紅染液，并使組織可以充分染色3min，染色完畢后，再將組織切片進(jìn)行梯度脫水，分別使用濃度為80%、95%以及無(wú)水乙醇進(jìn)行操作。80%的乙醇脫水5s，95%乙醇脫水2min，無(wú)水乙醇脫水2min。

6、組織樣本切片風(fēng)干封片：將脫水后的組織樣本切片使用二甲苯浸泡２次，每次持續(xù)４min，然后將組織樣本切片干，并使用中性樹(shù)膠封片。

7、最后在顯微鏡下觀察并拍照。

HE染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)