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PI染色實驗代測 檢測服務

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產(chǎn)品型號

品       牌

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地上海

更新時間:2025-02-13 09:37:54瀏覽次數(shù):870次

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PI染色實驗代測
服務項目:冰切包埋→冰凍切片→PI染色→熒光拍照→PI染色分析
樣本運輸要求:常溫運輸(4%多聚甲醛固定,可加冰袋運輸)
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PI染色實驗代測

PI染色簡介:

碘化丙啶( propidium iodide,PI )檢測早期死亡細胞膜通透性狀態(tài)的不同是區(qū)分細胞凋亡和壞死的一一個重要指標,凋亡細胞在進入最終溶解階段前,細胞膜通透性無明顯改變,相對分子質(zhì)量大的與DNA結(jié)合的熒光染料(如PI )不能進入凋亡細胞內(nèi),而相對分子質(zhì)量小的熒光染料(如Hoechest 3342或33258等)仍能被細胞攝取。應用流式細胞儀或熒光顯微鏡可區(qū)分和壞死細胞,細胞內(nèi)DNA出現(xiàn)Hoechest 3342 標記而不出現(xiàn)PI標記的為凋亡細胞。


PI染色原理:

主要是根據(jù)細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發(fā)生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態(tài)的改變等,其中細胞核的改變具有特征性。


PI實驗說明:

1、PI染色拍照使用的是熒光拍照。


實驗步驟(僅供參考):

1、收集細胞{數(shù)目約(1~ 5)×106個/mL},500 ~ 1000 r/min離心5min,棄去培養(yǎng)液。

2、3ml PBS洗滌1次。

3、離心去PBS,加入冰預冷的70%的乙醇固定,4℃,1—2小時。

4、離心棄去固定液,3mlPBS重懸5min。

5、400目的篩網(wǎng)過濾1次,500—1000r/min離心5min,棄去PBS

6、用1ml PI染液染色,4℃避光30min。

7、流式細胞儀檢測:PI用氬離子激發(fā)熒光,激光光波波長為488nm,發(fā)射光波波長大于630nm,產(chǎn)生紅色熒光分析PI熒光強度直方圖也可分析前散射光對側(cè)散射光的散點圖。

8、結(jié)果判斷:在前散射光對側(cè)散射光的散點圖或地形圖上,凋亡細胞與正常細胞相比,前散射光降低,而側(cè)散射光可高可低,與細胞的類型有關;在分析PI熒光的直方圖時,先用門技術(shù)排除成雙或聚集的細胞以及發(fā)微弱熒光的細胞碎片,在PI熒光的直方圖上,凋亡細胞在G1/G0期前出現(xiàn)一亞二倍體峰。如以G1/G0期所在位置的熒光強度為1.0,則一個典型的凋亡細胞樣本其亞二倍體峰的熒光強度為0.45,可用雞和鮭魚紅細胞的PI熒光強度做參照標準,兩者分別為0.35和0.7,可以確保在兩者之間的不是細胞碎片而是完整的細胞。


PI染色實驗代測




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