熒光光度法測(cè)定影響熒光強(qiáng)度的外部因素
1）溫度 溫度降低，熒光效率和熒光強(qiáng)度升高。
2）溶劑 隨著溶劑的極性的增加，熒光物質(zhì)的π→π* 躍遷幾率增加，熒光強(qiáng)度將增強(qiáng)，熒光波長(zhǎng)也 發(fā)生紅移；溶劑粘度降低，熒光強(qiáng)度降低；溶 劑應(yīng)達(dá)到足夠的純度。 化學(xué)工程與現(xiàn)代材料學(xué)院
3）pH值 ?具酸或堿性基團(tuán)的熒光物質(zhì)，在不同pH值時(shí)，其 結(jié)構(gòu)可能發(fā)生變化，因而熒光強(qiáng)度將發(fā)生改變。 NH3+ OHH+ NH2 OHH+ NH- ?利用金屬離子與有機(jī)試劑生成配合物進(jìn)行測(cè)定金 屬離子時(shí)，配合物的穩(wěn)定性和組成受溶液pH值影 響較大，從而影響到它們的熒光性質(zhì)。 Ga3++鄰－二羥基偶氮苯 Ga3++鄰－二羥基偶氮苯 化學(xué)工程與現(xiàn)代材料學(xué)院 pH 3~4 pH 6~7 1:1配合物(產(chǎn)生熒光) 1:2配合物(不產(chǎn)生熒光)
4)散射光 瑞利散射光(Rayleigh scattering light)：光子與物 質(zhì)分子發(fā)生彈性碰撞，不發(fā)生能量交換，運(yùn)動(dòng)方 向改變；λ瑞利光＝λ入射光 拉曼散射光(Raman scattering light) ：光子與物 質(zhì)分子發(fā)生非彈性碰撞，發(fā)生能量交換，運(yùn)動(dòng)方 向改變；λ拉曼光≠λ入射光 消除方法：選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長(zhǎng) 化學(xué)工程與現(xiàn)代材料學(xué)院 448 320 a.強(qiáng)度 360 激發(fā) 320nm 硫酸奎寧 448 350 激發(fā) 350nm 硫酸奎寧 b.強(qiáng)度 320 激發(fā) 320nm 0.1mol/L硫酸 360 350 激發(fā) 350nm 0.1mol/L硫酸 400 硫酸奎寧在不同激發(fā)波長(zhǎng)下的熒光
（a）與拉曼光譜（b） 化學(xué)工程與現(xiàn)代材料學(xué)院 在不同波長(zhǎng)激發(fā)光下主要溶劑的拉曼光波長(zhǎng)(nm) 溶劑 水 乙 醇 環(huán)己烷 CCl4 CHCl3 248 271 267 267 — — 激發(fā)光(nm) 313 365 405 350 416 469 344 409 459 344 408 458 320 375 418 346 410 461 436 511 500 499 450 502 化學(xué)工程與現(xiàn)代材料學(xué)院
5) 熒光熄滅 熒光熄滅（熒光猝滅）：熒光物質(zhì)分子與溶劑分 子或其他溶質(zhì)分子的相互作用引起熒光強(qiáng)度降低 的現(xiàn)象稱為熒光熄滅。 熒光熄滅劑：能引起熒光熄滅的物質(zhì)。 導(dǎo)致熒光熄滅的原因： ?碰撞猝滅 M+hv→M*,M*+Q → M+熱 ?靜態(tài)猝滅 M+Q → MQ 非熒光物質(zhì) ?轉(zhuǎn)入三重態(tài)的猝滅 三重態(tài) ?熒光物質(zhì)的自猝滅 熒光物質(zhì)濃度較高 ?氧的熄滅作用 化學(xué)工程與現(xiàn)代材料學(xué)院 熒光熄滅法: 熒光物質(zhì)加入某種熄滅劑后，其熒 光強(qiáng)度的減少與熒光熄滅劑的濃度呈線性關(guān)系， 可用于測(cè)定熄滅劑的含量，這種方法稱為熒光熄滅法。
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