TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
工作原理：在機(jī)體內(nèi)部隨時(shí)都在發(fā)生著細(xì)胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來(lái)觀察細(xì)胞的死亡，其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚，時(shí)間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活，細(xì)胞自身的染色質(zhì)或DNA被切割，出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口，并產(chǎn)生與DNA斷點(diǎn)數(shù)目相同的3’-OH末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase )可以將DI GAO XIN標(biāo)記的dUTP (DIG-dUTP)標(biāo)記至3’-OH末端，DIG-dUTP結(jié)合在DNA斷點(diǎn)部位，可以通過(guò)生物標(biāo)記的抗DI GAO XIN抗體(Anti-DIG-Biotin)反應(yīng)后，再結(jié)合鏈酶親和素-熒光素FITC(SABC-FITC)。FITC在490-495nm激化，在520-530nm發(fā)射熒光，呈黃綠色。凋亡的細(xì)包核呈黃綠色，從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細(xì)胞。
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒內(nèi)容：
1. 標(biāo)記緩沖液(Labeling Buffer) 1ml
2. 末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20) 20μι
3. DIG-dUTP (×20) 20μι
4. 封閉液(Blocking Reagent) 4ml
5. *化抗DI GAO XIN 抗體(× 100) 20μι
6. SABC-FITC (× 100) 20μι
7. Proteinase K (×200) 50μι
8. 抗體稀釋液4ml
9. 陽(yáng)性對(duì)照片2 張
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒用戶自備試劑：
1. 多聚賴氨酸或APES(卡邁舒公司有售)。
2. 0.01M TBS,pH7.5 (配法:1L 雙蒸餾水中加入8.5 克氯化鈉,1.2 克Tris 和0.45—0.5ml 純乙酸)。
3. 水溶性封片劑或熒光衰減封片劑（卡邁舒公司有售)。
4. DAPI染色液。
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