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上海酶聯生物研究所

ELISA試劑盒實驗防錯小知識

時間:2016-11-23閱讀:194
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ELISA試劑盒檢查體系可謂是免疫學反響應用到科研出產中zui為靈敏的技術手段。
但是在新老手操作過程中總是會呈現或大或小的問題,有時因為試驗的需求,包被原的特殊性也也許選用中性的緩沖溶液來包。
酶標板靈敏度過高。
應留意以下原理:因為蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經過,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的效果,這種物理吸附對錯特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響,大分子蛋白質較小分子蛋白質一般富含更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體外表。
做直接ELISA試劑盒法測試小鼠血清中的IgE抗體,設空白對照、和陰性對照、陽性血清稀釋倍數為5千、1萬、10萬、20萬不等,用的是*符號的羊抗鼠IgE抗體,和親和素的辣根過氧化物酶。
ELISA試劑盒加樣時的防錯小經驗
(1)用一張寫滿字的紙,字越多越好,比如報紙,墊在下面,這么,加過標本的小孔看過去下面的字會變小,沒加的字正常,十分簡單區(qū)別。
(2)能夠利用液面反光與沒有加的孔加以差異
(3)在標本加完后,再把加樣槍全壓下,使液面發(fā)生小氣泡,也能夠加以區(qū)別。
但是成果除了空白對照孔沒有色彩外,其他各孔全有色彩,并且OD值都相差不大,為何?
也許因素如下:
(1) 水質被金屬離子等污染;避免方法盡量運用新鮮水或蒸餾水。
(2) 洗刷不充沛,樣品中其它成分殘留或酶殘留;避免方法洗刷液應注滿微孔,充沛洗刷。
(3) 移液頭重復運用,未洗凈或消毒不*; 避免方法移液頭一次性運用。
ELISA試劑盒一抗顯色時間的控制等等,對于ELISA試劑盒的每一步都要留意才行。

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