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上海酶聯(lián)生物研究所

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大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化)(PC-12(低分化)

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更新時間:2017-07-25 16:15:09瀏覽次數(shù):267次

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大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化)(PC-12(低分化)
細胞介紹:
該細胞系來自能移植的雄性大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤。這些細胞表達神經(jīng)生長因子(NGF)受體。NGF可誘導(dǎo)產(chǎn)生神經(jīng)表型。這些細胞不合成腎上腺素。
細胞特性:
1)來源:腎上腺嗜鉻細胞瘤
2)形態(tài):多角形
3)含量:>lxl06 個/mL
4)污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者lmL凍存管包裝


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細胞培養(yǎng)步驟:
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1.準(zhǔn)備 RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號 21875-091),85%;馬血清 10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清5%。
2.培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
2)細胞處理:
復(fù)蘇細胞:將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤雔〇cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。


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對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分棄去上清液,補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量*,細胞變圓脫落后,加入約lml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加1〇%DMSO后進行凍存。
注意事項:
收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請即與我們。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
運輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺棄去上清,加入*使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至l〇cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。細胞用途:僅供科研使用。

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