特異性細(xì)胞免疫是由T細(xì)胞介導(dǎo)的，因此，細(xì)胞免疫檢測(cè)通常是檢查T(mén)細(xì)胞的數(shù)量、功能及其產(chǎn)物如細(xì)胞因子等，是了解機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的重要手段。
一、淋巴細(xì)胞的分離
細(xì)胞免疫檢測(cè)首先要從人或動(dòng)物血液及組織中分離出活的淋巴細(xì)胞。分離淋巴細(xì)胞的方法有多種，目前常用Ficoll密度梯度離心法直接分離外周血單個(gè)核細(xì)胞。
分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）的分層液是比重1.077±0.001的聚蔗糖(Ficoll)-*(Urografin)(F/H)分層液。紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細(xì)胞，就可從外周血中分離到單個(gè)核細(xì)胞。
【材料】肝素抗凝人血、淋巴細(xì)胞分層液、無(wú)Ca2+ 、Mg2+ hanks液、離心管、試管、吸管、毛細(xì)管、*。
【方法】
（1）采取新鮮靜脈血2ml，加入含0.1ml肝素（50單位）的試管中，加2mlhanks液混勻。
（2）用滴管將稀釋過(guò)的血液沿管壁緩慢加入2ml細(xì)胞分層液的液面上（分層液與稀釋血液體積比例為1：2），注意兩者不能混合，保持界面清楚，用水平離心機(jī)以2000轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘，離心完，可見(jiàn)紅細(xì)胞沉降至zui下層，上層為血漿，中層為分層液，血漿與分層液的界面有一比較清楚的乳白色淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞層細(xì)胞免疫檢測(cè)技術(shù)（見(jiàn)圖4-1）。用毛細(xì)滴管吸取該層，置含有1滴肝素及5倍以上體積無(wú)Ca2+ 、Mg2+ Hanks液的試管中，以2000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，棄上清液后，以同樣試液再洗滌一次。
（3）盡量吸去上清液，將沉于管底的細(xì)胞沉積塊搖散，加Hanks液至1ml作細(xì)胞計(jì)數(shù)，用Hanks液配成2×106細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液。
二、E花環(huán)形成試驗(yàn)（erythrocytc rosette forming test）
人類(lèi)T淋巴細(xì)胞表面CD2分子是綿羊紅細(xì)胞（SRBC）受體，也稱(chēng)E受體，在一定條件下，SRBC環(huán)繞T細(xì)胞與之結(jié)合，形成花環(huán)狀，稱(chēng)E花環(huán)（E-rosette），形成此種花環(huán)的細(xì)胞稱(chēng)E花環(huán)形成細(xì)胞（簡(jiǎn)稱(chēng)E-RFC）。
E花環(huán)試驗(yàn)可用作人外周T細(xì)胞的分離與鑒定。
【材料】淋巴細(xì)胞懸液、1%SRBC懸液、滅活之小牛血清、離心管、試管、吸管、載玻片、0.8%戊二醛、瑞氏染液。
【方法】
（1）取上述配好之淋巴細(xì)胞懸液0.1ml于潔凈小試管中，加入1%SRBC懸液0.1ml。再加入小牛血清0.1ml，混勻，置37℃水浴箱中5分鐘，500轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，放4℃冰箱2-24小時(shí)。
（2）從冰箱中取出試管，留適量上清液，輕輕搖勻，加0.8%戊二醛2滴，輕搖后，置4℃冰箱15分鐘，取出，作成涂片，待自然干燥，以瑞氏染液染色。
（3）計(jì)數(shù)：鏡下觀察，凡結(jié)合三個(gè)以上SRBC的T細(xì)胞即為E-RFC，計(jì)數(shù)200個(gè)淋巴細(xì)胞，求出E-RFC占淋巴細(xì)胞總數(shù)的百分率。
【結(jié)果】
一般認(rèn)為E-RFC的正常值在60％以上，如少于50％則為低下。如欲分離T細(xì)胞，可用密度梯度離心，E-RFC因比重增大而沉于管底，與其他細(xì)胞分離；用低滲法裂解花結(jié)中的SRBC，即可獲得純化的T細(xì)胞。
三、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（微量全血法 ）
T細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，當(dāng)受到非特異性的有絲分裂原（PHA）刺激后可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，并進(jìn)行有絲分裂，轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞，在形態(tài)上出現(xiàn)了幼稚化，光鏡下很容易識(shí)別，可通過(guò)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率反映機(jī)體T細(xì)胞免疫功能。此試驗(yàn)也可用3H-TdR摻入法或MTT法定量檢測(cè)。
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