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技術(shù)文章

葡萄糖－6－磷酸脫氫酶熒光斑點試驗

閱讀：269發(fā)布時間：2015-7-2

實驗方法原理    在葡萄糖－6－磷酸（GbB）和NADP存在下，葡萄糖－6－磷酸脫氫酶（G6PD）能使用NADP還原成NADPH，后者在紫外線照射下不會發(fā)出熒光。
實驗材料    G6P NADPHCl
試劑、試劑盒    氧化型*皂素蒸餾水
實驗步驟    
一、 實驗試劑：混合試劑的與配方：

0.1mol/L    G6P     1ml

7.5mmol/L     NADP  1ml   0.7mol/L    tris－HCl（PH7.8）3ml

8mmol/L       氧化型* 1ml

10g/L皂素2ml

蒸餾水2ml

如混合試劑分裝后－20℃保存，可穩(wěn)定數(shù)月

二、實驗操作：

1. 標(biāo)本采集：EDTA·Na2H或肝素抗凝全血，若置4℃保存可穩(wěn)定1周，亦可用肝素化毛細血管從手指或足踉采末梢血液。

2. 取12MM×75MM試管3支，患者．正常（對照）和陽性（對照），血各管加入追合試劑200微升．

3. 向各管分別加入患者正常和陽性的抗凝全血20微升，混合后置25℃室溫中。

4. 在反應(yīng)0／min（混勻后立即吸出）5min和10min時分別從各管吸出反應(yīng)液1滴，加于新華1號液紙上，使充分干燥．

5. 在暗室內(nèi)，用波長200-340nm的紫外線照射濾紙上的斑點，檢查有無熒光．

6. 正常人的0min斑點無熒光，5min和10min斑點出現(xiàn)熒光，10min斑點熒光zui強，G6PD缺陷患者在0min. 5min和10min均無熒光。

三、 實驗結(jié)果：正常人有甚強的熒光，G6PD缺陷患者熒光很弱或無熒光，雜合于或某些G6PD變異體者則可能有輕度到中度熒光．
收起 
注意事項    
1. 本法是直接測定；NADPH的量特異性較好．

2. 每次或每批要有G6PD正常和缺陷者的標(biāo)本作對照．


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