【摘要】目的建立液相色譜法測(cè)定魚(yú)鰾*中補(bǔ)骨脂素的含量。方法采用HypersilODSC18（4.6mm×200mm,5μm）色譜柱，乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70）為流動(dòng)相，流速為1.0ml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)245nm。結(jié)果補(bǔ)骨脂素在0.07168～0.35840μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9999,平均回收率為100.29%（n=6）,RSD=1.47%。結(jié)論所建立的方法穩(wěn)定、可靠，可為該產(chǎn)品建立質(zhì)量控制方法提供參考。
【關(guān)鍵詞】液相色譜法；魚(yú)鰾*；補(bǔ)骨脂素；含量測(cè)定
【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofpsoraleninYubiaobushenpills.MethodsHypersilODSC18column（200mm×4.6mm,5μm）wasusedwithphaseofacetonitrile-0.1%phosphoricacidsolution（30:70）.Theflowratewas1.0ml/minanddetectionwavelengthwas245nm.ResultsThelinearityrangeofpsoralenwas0.07168～0.35840μg（r=0.9999）,theaveragerecoveryratewas100.29%（n=6）withRSD1.47%.ConclusionThismethodisaccurate,reproducible,andcanbeusedforthequalitycontroloftheYubiaobushenpills.
【Keywords】HPLC;Yubiaobushenpill;psoralen;determination
魚(yú)鰾*由魚(yú)鰾膠、枸杞子、當(dāng)歸、補(bǔ)骨脂、淫羊藿等組成，具有壯陽(yáng)益精等功效，用于腎陽(yáng)虛弱，腎精虧損所致的頭昏、眼花等。該藥品標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第八冊(cè),缺含量測(cè)定項(xiàng)。方中補(bǔ)骨脂有補(bǔ)腎助陽(yáng)的功效，為重要臣藥，其主要有效成分為補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素［1］，本文采用液相色譜法對(duì)補(bǔ)骨脂的補(bǔ)骨脂素進(jìn)行了含量測(cè)定研究。該方法穩(wěn)定、可靠，可為該產(chǎn)品建立質(zhì)量控制方法提供參考。
1儀器與試藥
島津LC-10AD液相色譜儀（配有SPD-10A檢測(cè)器，N2000色譜工作站），AE240電子分析天平（梅特勒公司）。補(bǔ)骨脂素對(duì)照品（供含量測(cè)定用，批號(hào)：110739-200309，中國(guó)藥品生物制品檢定所提供），3批魚(yú)鰾*（批號(hào)分別為：20060112，20060119，20060326）。乙腈、磷酸為色譜純，水為超純化水，其他試劑均為分析純。
2溶液的制備
2.1對(duì)照品溶液精密稱取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品17.92mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
2.2供試品溶液取本品適量，剪碎，取約1.5g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率300W，頻率50kHz）45min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。
2.3缺補(bǔ)骨脂陰性樣品溶液取缺補(bǔ)骨脂陰性樣品，同“2.2"項(xiàng)下方法操作，即可。
3方法與結(jié)果
3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜柱為HypersilODSC18（4.6mm×200mm,5μm）,流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70），流速為1.0ml/min,柱溫為室溫。分別精密吸取“2"項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液及缺補(bǔ)骨脂陰性樣品溶液各10μl,注入液相色譜儀，按本色譜條件測(cè)定。結(jié)果補(bǔ)骨脂素理論塔板數(shù)為15000以上，補(bǔ)骨脂素與鄰近的雜質(zhì)峰分離度為3.6以上，陰性樣品在補(bǔ)骨脂素對(duì)照品相同保留時(shí)間位置上未見(jiàn)色譜峰，說(shuō)明方中其他成分對(duì)補(bǔ)骨脂素測(cè)定無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖1。
3.2線性關(guān)系考察精密吸取“2.1"項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（0.1792mg/ml）0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml,分別置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)。分別吸取續(xù)濾液10μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，并以峰面積（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X，μg）進(jìn)行線性回歸，得線性方程：Y=4843233.40X+32673.65,r=0.9999,進(jìn)樣量在0.07168～0.35840μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。A.對(duì)照品B.樣品C.陰性樣品
3.3精密度、重復(fù)性試驗(yàn)和穩(wěn)定性試驗(yàn)按上述色譜條件，精密吸取“2.1"項(xiàng)下對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μl,峰面積平均值為862783.9,RSD為0.7%,結(jié)果表明精密度良好。按“2.2"項(xiàng)下方法處理同一批樣品（批號(hào)：20060112）6份，HPLC分析，進(jìn)樣量均為10μl，含量的平均值為0.3012mg/g，RSD為1.5%,結(jié)果表明重復(fù)性良好。精密吸取“2.2"項(xiàng)下供試品溶液10μl，按上述色譜條件于0、2、4、8、12h進(jìn)樣測(cè)定，峰面積平均值為896126.5,RSD為2.0%，結(jié)果表明供試品溶液在室溫下12h內(nèi)穩(wěn)定。
3.4加樣回收試驗(yàn)取已知含量的魚(yú)鰾*樣品（批號(hào)：20060119，含量為0.3065mg/g）6份，每份約0.75g，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入對(duì)照品溶液（0.02203mg/ml）各10ml,再按“2.2"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，HPLC分析，進(jìn)樣量均為10μl，結(jié)果見(jiàn)表1。表1加樣回收率測(cè)定結(jié)果
3.5樣品的測(cè)定精密稱取3批樣品（批號(hào)分別為：20060112，20060119，20060326）各3份，每份1.5g。按“2.2"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，HPLC分析，進(jìn)樣量均為10μl，按外標(biāo)法計(jì)算補(bǔ)骨脂素含量，結(jié)果見(jiàn)表2。表2樣品測(cè)定結(jié)果
4討論
4.1流動(dòng)相的選擇參考文獻(xiàn)資料［2，3］，試驗(yàn)中考察了三組流動(dòng)相系統(tǒng)：甲醇-水、乙腈-水，乙腈-0.1%磷酸溶液，結(jié)果表明以乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70）為流動(dòng)相對(duì)，補(bǔ)骨脂素峰基線分離，且峰形較好，故選擇流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（30：70）。
4.2提取方法的選擇［2，3］比較超聲提取與回流提取，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂素提取率相差不大，因超聲提取供試品溶液所含雜質(zhì)較少，且方法簡(jiǎn)單，便于操作，故選擇超聲提取。曾試驗(yàn)了甲醇和稀乙醇提取，結(jié)果甲醇優(yōu)。考察了甲醇溶劑量（15，25，35ml），結(jié)果選擇甲醇25ml。考察了提取時(shí)間（30，45，60min），結(jié)果選擇45min。
4.3由于缺補(bǔ)骨脂陰性樣品在異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品相同保留時(shí)間位置上有干擾色譜峰出現(xiàn)，故未建立其含量測(cè)定方法。
【參考文獻(xiàn)】
1江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（上冊(cè)）.上海：上海人民出版社，1977，1177-1179.
2國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典，2005年版一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005，129.
3傅欣彤，李琰，張小茜，等.HPLC法測(cè)定五味益腎酒中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量.藥物分析雜志，2008，28（3）：405-410.
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