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技術(shù)文章

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)研究

閱讀:227發(fā)布時間:2016-2-24

一、對腫瘤細(xì)胞系或細(xì)胞株的評價
 
已建成的各種腫瘤細(xì)胞系或細(xì)胞株,無疑都是可用的實(shí)驗(yàn)對象。近年我國已建成的腫瘤細(xì)胞系已非常多,并獲得越來越廣泛的應(yīng)用。但根據(jù)研究者的經(jīng)驗(yàn),在使用這些細(xì)胞系時,應(yīng)持特別審慎態(tài)度,主要是應(yīng)考慮到這些細(xì)胞在長期傳代中有否發(fā)生遺傳性改變的可能。*,長期傳代細(xì)胞系染色體核型常是不穩(wěn)定的。另外也可能發(fā)生如基因突變、基因易位或缺失等變化。其結(jié)果可能導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生生物學(xué)性狀上的變動。
 
以近年建成的各種腫瘤細(xì)胞系為例,都已傳代少則幾十,多則百代以上后,才確認(rèn)建成了細(xì)胞系。這種情況下很難保證細(xì)胞從初代到建成時的性狀仍是一致的。已如前述,癌細(xì)胞在培養(yǎng)中并非能很順利地傳下去,凡已長期傳代的細(xì)胞系,都已獲得不死性。當(dāng)前尚未*確證所有癌細(xì)胞都具有不死性;因此尚難肯定在長期培養(yǎng)中的癌細(xì)胞的生物學(xué)性狀與體內(nèi)時仍*相同(包括不死性)。據(jù)上述對用癌細(xì)胞系所獲實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)盡量做分析性的結(jié)論,避免做概括性的與體內(nèi)等同的結(jié)論,外推與體內(nèi)等同更是不妥的。廣泛來說,應(yīng)用各種較長時間培養(yǎng)細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)時,都應(yīng)如此。

二、提高腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)存活率和生長率措施
 
根據(jù)人們的經(jīng)驗(yàn),腫瘤細(xì)胞在體外不易培養(yǎng),建立能傳代的腫瘤細(xì)胞系更為困難。當(dāng)腫瘤組織或細(xì)胞初代接種培養(yǎng)后,常出現(xiàn)以下幾種情況:
 
1.  *無細(xì)胞游出或移動;
 
2.  有細(xì)胞移動和游出,但無細(xì)胞增殖,細(xì)胞長時間處于停滯狀態(tài)以致難以傳代;
 
3.  有細(xì)胞增殖,傳若干代后停止生長或衰退死亡;
 
4.  傳數(shù)代后細(xì)胞增殖緩慢,經(jīng)過一段停滯期后,才又呈旺盛生長狀態(tài),形成穩(wěn)定生長的腫瘤傳代細(xì)胞系。
 
以上現(xiàn)象說明腫瘤細(xì)胞對體外生存條件有較高的要求,并需經(jīng)過對新環(huán)境的適應(yīng)才能生長,因此欲獲得好的培養(yǎng)效果,不能局限于一般培養(yǎng)法,必須采用一些特殊的措施。
 
1.  適宜底物
 
把經(jīng)過純化的細(xì)胞接種在不同的底物上,如鼠尾膠原底層、飼細(xì)胞層等。
 
2.  生長因子
 
應(yīng)用促細(xì)胞生長因子,向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細(xì)胞生長因子。根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促生長物,常用有胰島素、*、雌激素以及其它生長因子。
 
為提高腫瘤細(xì)胞對體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細(xì)胞(干細(xì)胞)的數(shù)量,可采用動物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后,再從動物體內(nèi)取出進(jìn)行培養(yǎng),能提高體外培養(yǎng)的成功率。受體動物以裸鼠。
 
3、動物體媒介培養(yǎng)方法
 
(1)瘤塊接種:取新鮮瘤組織,用 Hanks液洗凈血污,切成 1~3毫米小塊,用穿刺針頭吸一小瘤塊,用酒精棉球擦拭動物腹部后,直接刺入皮下,注入瘤塊。
 
(2)飼養(yǎng)觀察,待腫瘤生長達(dá)較大體積后,剝?nèi)〕隽鼋M織。
 
(3)進(jìn)行體外培養(yǎng)。
 
(4)為防止失敗,仍取部分瘤組織繼續(xù)在裸鼠體內(nèi)傳代。通過裸鼠媒介接種,有活力的腫瘤細(xì)胞數(shù)量增多,細(xì)胞培養(yǎng)易于成功。


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