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技術(shù)文章

觀察細(xì)胞形態(tài)實(shí)驗(yàn)步驟

閱讀：241發(fā)布時(shí)間：2016-3-29

一、方法

 

1.  在平皿中有三張成纖維細(xì)胞貼壁生長的蓋片，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將一張蓋片移入另一皿中繼續(xù)培養(yǎng)，用作對照。

 

2.  在有兩片的平皿內(nèi)加100 μg/ml 的細(xì)胞松弛素B 4滴繼續(xù)培養(yǎng)半小時(shí)。

 

3.  將用細(xì)胞松弛素B處理過的兩張蓋片取一張做染色處理，另一張用培養(yǎng)液洗五次（在平皿內(nèi)換五次培養(yǎng)液，每次都要搖動(dòng)），繼續(xù)培養(yǎng)、觀察。兩小時(shí)后細(xì)胞形狀恢復(fù)，接近正常。

 

4.  對恢復(fù)的蓋片與*張沒用藥的蓋片一同做染色處理。

 

5.  染色處理

 

（1）將需染色的蓋片放入盛有PBS的平皿內(nèi)用吸管輕輕吹洗蓋片，換液三次，每次3分鐘，洗去培養(yǎng)液。

 

（2）將蓋片移入2%Triton  X-100液，置37℃恒溫箱內(nèi)處理20~30分鐘，以提取骨架以外的蛋白質(zhì)，使骨架圖像清晰。

 

（3）立刻將蓋片移入M-緩沖液，換洗三次，每次3分鐘。M-緩沖液有穩(wěn)定細(xì)胞骨架的作用。

 

（4）將蓋片移入3%戊二醛固定15分鐘。

 

（5）將蓋片移入0.2%考馬斯亮蘭染液中，染色15分鐘。然后小心地用自來水沖洗，空氣干燥。

 

二、結(jié)果

 

1.  光鏡觀察，微絲聚集成的張力纖維束被染成藍(lán)色。

 

2.  在沒用藥的標(biāo)本上，成纖維細(xì)胞多數(shù)有突起，微絲沿突起規(guī)則排列。

 

3.  用細(xì)胞松馳素B處理的標(biāo)本，由于微絲被破壞突起縮回，多數(shù)細(xì)胞形狀變圓。

 

4.  用藥處理后又洗去藥的標(biāo)本，由于解除了藥的作用，肌動(dòng)蛋白重新聚臺(tái)形成微絲，細(xì)胞形狀恢復(fù)正常。


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