ELISA試劑盒在實驗條件（包括試劑）較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為合適。在得出標本（S）和陰性對照（N）的A值后，計算S/N值。也有寫作P/N的，這里的P不代表陽性（positive），而是?。╬atient）的縮寫，不應(yīng)誤解。為避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA試劑盒中，有些作者定出S/N為陽性標準，現(xiàn)多為各種測定所沿用。
ELISA試劑盒實際上每一測定系統(tǒng)應(yīng)該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應(yīng)注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質(zhì)的人血清。有的試劑盒中所設(shè)陰性對照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，以致反應(yīng)后產(chǎn)生的本底可能較正常人血清的本底低得多。陽性判定值（cut-off value）一般為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù)，以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標準。ELISA試劑盒用此法判斷結(jié)果要求實驗條件十分恒定，陽性和陰性的對照品應(yīng)符合一定的規(guī)格，須配用精密的儀器，并嚴格按規(guī)定操作。ELISA試劑盒陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的系統(tǒng)中通過對大量標本的實驗檢測而得到的。