利用兩種不同直徑的膠體金顆粒標(biāo)記兩種第二抗體，在電鏡下進(jìn)行兩種不同抗原的亞細(xì)胞定位。基本原則：首先需購(gòu)買擬研究的兩種抗原的特異性抗體 ，以及不同直徑金顆粒標(biāo)記的相應(yīng)第二抗體，然后在同一張載網(wǎng)上分別或同時(shí)顯示組織細(xì)胞內(nèi)兩種抗原所在部位。染色方法主要為包埋后染色，操作步驟與顯示單一抗原的包埋后染色程序基本相同，在*種抗體染色后，再重復(fù)上述染色過(guò)程，顯示另外一種抗原成分。也可分別將兩種不同種屬來(lái)源的特異性抗體(*抗體)和不同直徑膠體金顆粒標(biāo)記的相應(yīng)第二抗體 混合，直接孵育，這樣可節(jié)省重復(fù)染色過(guò)程所需要的時(shí)間，并可減少重復(fù)染色帶來(lái)的污染。
 

   理想的染色結(jié)果應(yīng)背景清潔，金顆粒集中在抗原抗體反應(yīng)部位。欲獲得*染色，實(shí)驗(yàn)中需注意：
    ①用高特異性和高親和力抗體；

    ②被檢組織細(xì)胞需含一定量抗原，如抗原太少，則難以被抗體標(biāo)記；