1. 固定

用4%的多聚甲醛固定液。對于冰凍切片，甲醛固定有時比冰凍丙酮好；但對于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。 有時候商品化的抗體會有比較適合而推薦的固定液，請于購置前注意說明書。

（1）BouinS固定液：飽和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其對組織的穿透力較強，固定較好，結構完整，但因偏酸，對抗原有一定損害，且組織收縮明顯，不適于組織標本的長期保存。

（2）PLP液：即高碘酸鈉-賴氨酸-多聚甲醛，適于固定石蠟切片。適于富含糖類組織，對超微結構及許多抗原的抗原性保存較好。

2. 組織脫水、透明

時間不能太長，否則在切片時容易碎片，切不完整。

3. 切片時展片

有些組織在切片后難以在水中展開，這時可適當地在水中加入幾滴乙醇。

4. 烤片

60℃ 30分鐘或37℃ 過夜，溫度太高或時間太長，抗原容易丟失。

5. 蠟塊及切片的保存

在4℃保存