試劑空白有哪些不良現(xiàn)象

    ELISA試劑盒試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì)；如利用Trinder反應(yīng)為原理的檢測(cè)試劑會(huì)因含酚類(lèi)物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、*等檢測(cè)試劑會(huì)因基質(zhì)分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。*氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等負(fù)反應(yīng)，在放置過(guò)程中其試劑空白吸光度會(huì)因NADH自行氧化為NAD+而下降。原則上，吸光度上升的反應(yīng)，其試劑空白吸光度越低越好，不能超過(guò)一個(gè)高限；相反，吸光度下降的反應(yīng)，其試劑空白吸光度不能低于一個(gè)低限。因此，試劑空白吸光度限值，常作為程序參數(shù)輸入儀器，如經(jīng)核查超限，儀器會(huì)自動(dòng)報(bào)警，提示更換試劑。需要指出的是，還原型輔酶I(或II)等投料量不足或劣質(zhì)的原料，往往需要加大用量，才使“表觀"吸光度上升，湊合過(guò)試劑空白核對(duì)的“關(guān)"，其后果為如下情況：ELISA試劑盒

1．1 線性范圍變窄 現(xiàn)象：高值測(cè)不高。原因：生產(chǎn)試劑時(shí)有效成分投料量不足；試劑成份穩(wěn)定性較差。

1．2 靈敏度變低現(xiàn)象：酶促反應(yīng)速度曲線斜率下降，測(cè)定結(jié)果有嚴(yán)重系統(tǒng)誤差。原因：試劑底物濃度不足。

1．3 低值偏高 現(xiàn)象：試劑空白的變化曲線(吸光度VS時(shí)間)明顯波動(dòng)。原因：試劑自身不穩(wěn)定，自行分解；工具酶純度不夠，雜酶含量超限，導(dǎo)致干擾作用。ELISA試劑盒