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上海研生生化試劑有限公司

微核試驗(yàn)

時間:2015-12-28閱讀:501
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    微核與染色體損傷有關(guān),是染色體或染色單體的無著絲點(diǎn)斷片或紡錘絲受損傷而丟失的整個染色體,在細(xì)胞分裂后期在細(xì)胞質(zhì)中,末期之后,單獨(dú)形成一個或幾個規(guī)則的次核,包含在子細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi),因其比主核小,故稱微核。

    微核試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)是操作簡便,容易觀察,具有分裂能力的培養(yǎng)細(xì)胞均可用于顯示微核。選擇細(xì)胞較大,細(xì)胞質(zhì)豐富,細(xì)胞質(zhì)完整的雙核淋巴細(xì)胞,微核游離于細(xì)胞質(zhì)中與主核*分開,著色與主核一致或略淺,大小為主核的1/3以下。一般需要計(jì)數(shù)2000個細(xì)胞。

一、實(shí)驗(yàn)材料

1.受試材料人外周血。

2.RPMll640培養(yǎng),含20%小牛血清。

3.KCl低滲液 配制75mmol/L KCl水溶液。

4.固定液(甲醇:冰醋酸一3:1)。

5.Glemsa染液。細(xì)胞

6.松胞素(Cyt—B)6μg/ml。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.常規(guī)外周血37℃培養(yǎng)96小時,不加秋水仙素。

2.將培養(yǎng)物移人離心管中,1000r/min,離心8min,棄上清液。

3.每管加入75mmol/L KCl溶液3ml,37℃低滲處理3min。

4.每管加入甲醇冰醋酸(3:1)固定液l ml,輕輕打勻預(yù)固定。

5.1200r/min,離心8min,棄上清液。

6.每管加上述固定液3 ml,置室溫固定:3min。

7.1000 r/min,離心8min,棄上清液加少許固定液混勻滴片。

8.10%Giernsa染色10min。

三、結(jié)果分析

微核計(jì)數(shù)的標(biāo)準(zhǔn):

1.微核著色深淺與主核相同。

3.位于胞漿內(nèi)。細(xì)胞

4.與主核不連接(以區(qū)別主核的突起)。

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