1 資料和方法

1.1 觀察對(duì)象

    隨機(jī)選取初診為喉癌的患者36例，組織病理學(xué)證實(shí)均為鱗狀上皮癌，其中高分化2例，低分化29例;男30例，女6例，平均年齡(60.0±8.1)歲。取活檢前全部病例均未接受任何治療。按照抗癌協(xié)會(huì)TNM分期的方案，36例中Ⅰ期6例，Ⅱ期15例，Ⅲ期9例，Ⅳ期6例。

1.2 免疫組化染色

    取喉部腫瘤活檢標(biāo)本，分為2份，其中1份送組織病理學(xué)檢查證實(shí)喉癌的診斷，另1份作免疫組織化學(xué)檢測(cè)(下稱(chēng)免疫組化)。采用腎癌組織為陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本。將組織作厚度為5 μm的切片，經(jīng)脫蠟等常規(guī)處理后，其中1張切片做HE染色，另1張做免疫組化用。簡(jiǎn)單的免疫組化的操作步驟如下：對(duì)切片加入1%H2O2甲醇溶液，抑制內(nèi)源性過(guò)氧化物酶;在磷酸緩沖液( PBS)中洗5 min，共3次;滴加3%的非免疫馬血清，在37℃保溫20 min，阻斷非特異性免疫結(jié)合反應(yīng);在PBS中洗滌，方法同前;滴加抗PCNA或survivin單克隆抗體(Santa Cruz產(chǎn)品)，稀釋度為1∶50 溶液，37℃溫育60 min后放在4℃冰箱中過(guò)夜;次日按前法用PBS 洗滌，再滴加*化羊抗鼠IgG單克隆抗體(北京中山生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，1∶50 稀釋)，在37℃中保溫40 min;按前法PBS洗滌后滴加ABC復(fù)合物(北京中山生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，1∶50稀釋)，37℃保溫40 min;按前法用PBS洗滌，滴加新鮮配制的酶底物二氨基聯(lián)苯二胺鹽酸鹽顯色，zui后用蘇木素輕度復(fù)染。陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本，按上述步驟染色。陰性對(duì)照標(biāo)本除以PBS代替*抗體外，其它步驟與被測(cè)標(biāo)本相同。

    結(jié)果判斷：光鏡下觀察到細(xì)胞核或胞漿內(nèi)出現(xiàn)紅棕色顆粒為陽(yáng)性(PCNA在胞核，survivin在胞漿和胞核)，不染色為陰性。在切片四角和*各選一高倍視野，各計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10%者界定為陽(yáng)性病例，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%者為界定陰性病例。

1.3 化學(xué)治療

    *20～25 mg/m2，靜脈滴注，每天1次，共3 d;甲酰四氫*鈣100 mg，靜脈滴注，每天1次，共5 d;5氟*500～750 mg/m2，靜脈滴注，每天1次，共5 d;*8 mg溶于20 mL生理鹽水內(nèi)，靜脈推注，每天1次，共4 d。每月循環(huán)1次，共3個(gè)月。

    患者的*療效按RECIST[2]評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。*緩解(CR)：所有目標(biāo)病灶消失，無(wú)新病灶出現(xiàn)，腫瘤標(biāo)記下降至正常，并維持4周;部分緩解(PR)：所有(一個(gè)或多個(gè))基線目標(biāo)病灶zui長(zhǎng)徑總和減少≥30%，并維持4周;疾病穩(wěn)定(SD)：所有基線目標(biāo)病灶zui長(zhǎng)徑總和縮小但未達(dá)PR，或增大但未達(dá)PD;疾病進(jìn)展(PD)：較已記錄到得zui小目標(biāo)zui長(zhǎng)徑總和增大≥20%，或出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)新病灶。本研究將CR及PR視為對(duì)*敏感，SD及PD視為對(duì)*不敏感。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用確切概率法。

2 結(jié)果

2.1 *效果

    36例喉癌，經(jīng)*、5氟*和*聯(lián)合*方案治療后，對(duì)*敏感者有24例，占66.6%;對(duì)*不敏感者有12例，占33.3%。抗體

2.2 PCNA在喉癌中的表達(dá)及其與喉癌組織*敏感性的關(guān)系

    PCNA陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)位于細(xì)胞核，36例喉癌中，陽(yáng)性表達(dá)者20例，占55.6%;陰性表達(dá)者16例，占44.4%。PCNA陽(yáng)性組的*敏感性(90.0%)明顯高于PCNA陰性組(37.5%)(P<0.01)，見(jiàn)表1。

2.3 survivin在喉癌中的表達(dá)及其與喉癌組織*敏感性的關(guān)系

survivin陽(yáng)性表達(dá)信號(hào)位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，36例喉癌中，陽(yáng)性表達(dá)者23例，占63.8%;陰性表達(dá)者13例，占36.2%。survivin陽(yáng)性組的*敏感性(90.0%)與survivin陰性組的敏感性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(65.2% vs 69.2%, P>0.05)，見(jiàn)表2。表1 喉癌組織PCNA陽(yáng)性組與陰性組對(duì)*敏感性的比較表2 喉癌組織survivin陽(yáng)性組與陰性組對(duì)*敏感性的比較 例(%)兩組比較：P=1.000(確切概率法)。

3 討論

    *在惡性腫瘤的治療中具有重要作用。*效果取決于腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性。導(dǎo)致*失敗的原因很復(fù)雜，存在著多種機(jī)制，例如腫瘤多藥耐藥性(MDR)是腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物表現(xiàn)出耐藥性的作用機(jī)制之一，某些影響細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖、凋亡的基因分子也影響腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物的敏感性。

    PCNA是一種分子質(zhì)量為36 000非組蛋白細(xì)胞核多肽，是DNA復(fù)制時(shí)聚合酶6的輔助成分，在細(xì)胞增殖中起著重要作用，其表達(dá)在G1期開(kāi)始增高，s期達(dá)到高峰，G2期和M期明顯下降。腫瘤細(xì)胞中PCNA含量反映了腫瘤增生能力的高低。有研究發(fā)現(xiàn)，晚期卵巢癌、腺癌、軟組織肉瘤、骨腫瘤及宮頸癌等中的高PCNA表達(dá)病例的*效果較好，因而提出腫瘤細(xì)胞的PCNA表達(dá)水平可以預(yù)測(cè)某些腫瘤對(duì)*的敏感性[3]。survivin作為凋亡抑制蛋白家族(IAPs)中結(jié)構(gòu)*的新成員，其分子量zui小，但具有強(qiáng)大抗凋亡作用。survivin特異性表達(dá)于胚胎和胎兒組織及絕大多數(shù)腫瘤組織，但在終末分化的成人組織(除胸腺、生殖腺外)中不表達(dá)。多方面的研究提示，它與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，且其表達(dá)往往與腫瘤的惡性程度、預(yù)后不良呈正向關(guān)系。反義survivin核酸降低survivin表達(dá)后，增強(qiáng)胃癌細(xì)胞對(duì)*藥物*的敏感性[4]。PCNA和survivin的異常表達(dá)在喉癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，并且與喉癌的組織分化程度、臨床分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為喉癌的病理診斷及判斷預(yù)后的參考指標(biāo)[5]。

    PCNA和survivin的異常表達(dá)可作為喉癌的病理診斷及判斷預(yù)后的參考指標(biāo)，那么，能否作為*敏感性的指標(biāo)呢?在本實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)PCNA表達(dá)陽(yáng)性的喉癌組織對(duì)*敏感性明顯高于PCNA陰性組(90.0% vs 37.5%, P<0.01), 說(shuō)明PCNA在喉癌中表達(dá)可以增強(qiáng)腫瘤對(duì)*的敏感性。而survivin陽(yáng)性病例與survivin陰性病例相比較, 喉癌對(duì)*的敏感性差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說(shuō)明survivin的表達(dá)對(duì)喉癌*敏感性的影響不大。我們的研究結(jié)果提示, PCNA高表達(dá)可作為預(yù)測(cè)喉癌對(duì)*敏感的指標(biāo)之一，而survivin的異常表達(dá)似不宜作為預(yù)測(cè)喉癌對(duì)*敏感的指標(biāo)。但由于本實(shí)驗(yàn)所研究的病例數(shù)尚較少，需要增加病例做進(jìn)一步研究。 抗體