當在含血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的納米細菌被轉移至不含血清的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)時 (DMEM或RPMI-1640), 在1 a之內(nèi)就可以觀察到納米細菌出現(xiàn)貼壁現(xiàn)象, 在1 wk之內(nèi), 就可以在納米細菌的周圍形成幾微米厚的生物被膜 (biofilm), 并且緊緊貼附于培養(yǎng)瓶底部, 而納米細菌棲息其中(這與在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的納米細菌的形態(tài)明顯不同), 此時其大小接近于一個酵母細胞, 2-3 wk以后, 由于生物被膜的增厚, 其直徑已近似于一個紅細胞的大小. 用EDX法對這種生物被膜的化學組成進行分析, 顯示其鈣磷的峰值與羥基磷灰石極其相似, 電子顯微鏡觀察以及傅立葉轉換紅外頻譜(fourier transform IR spectroscopy, FTIR)分析顯示其主要成分為碳酸羥基磷灰石(carbonate hydroxyapatite), 而且,不論在有無血清作為添加劑的情況下, 都可以見到這種被羥基磷灰石包繞的納米細菌, 這種情況甚至可以在處于分裂期的納米細菌中見到. 納米細菌并不產(chǎn)生*和堿性磷酸酶, 并且即便經(jīng)過長達數(shù)周的培養(yǎng), 其培養(yǎng)基的pH值也不會出現(xiàn)明顯的變化, 一直穩(wěn)定在7.4左右, 這表明在納米細菌細胞膜表面所生成的羥基磷灰石結晶是源自于生物大分子的, 即生物礦化現(xiàn)象, 而并非是由于pH值改變所導致的簡單的物理結晶現(xiàn)象.納米細菌利用培養(yǎng)體系中的鈣、磷合成羥基磷灰石作為其生物被膜的主要成分, 這種生物礦化過程受到生長環(huán)境中某些因素的調控, 從而使其呈現(xiàn)不同的外觀, 如羥基磷灰石形、細菌被膜形、沙粒形、結石形和類似腫瘤的外形. （這也許就是國內(nèi)的一些研究者們認為其是一些磷酸鹽類的無機物的部分原因吧?。?。在含有新鮮血清的培養(yǎng)基中納米細菌的生物礦化現(xiàn)象程度較輕微, 這是由于血清中含有強效羥基磷灰石合成抑制因子, 骨鈣素 (osteocalcin) 和胎球蛋白(fetuin), 由于這些抑制蛋白的存在, 所以在有血清存在的情況下, 納米細菌的生物礦化作用受到明顯抑制. 當血清濃度降低時, 納米細菌的生物礦化現(xiàn)象增強, 在不含血清的培養(yǎng)體系中, 生物礦化現(xiàn)象劇烈而迅速. 盡管改良的Loeffler固體培養(yǎng)基中含有750 mL/L血清成分, 但血清蛋白成分在滅菌過程中受到破壞, 所以在此培養(yǎng)基中的納米細菌的礦化作用并不受抑制, 在此培養(yǎng)基中生長的納米細菌其菌落直徑可達1-5 mm. 另外, 當有乙二胺四乙酸(EDTA)存在時, 納米細菌的生物現(xiàn)象會受到明顯的抑制.由于礦化生物被膜的保護作用以及極其緩慢的新陳代謝率, 使納米細菌能夠耐受各種不利的物理條件和化學損傷因素以及多種抗生素的打擊. 2.4納米細菌的檢測方法 由于納米細菌在標準微生物培養(yǎng)基中無法生長, 并且即便是在zui適宜其生長的細胞培養(yǎng)環(huán)境中, 納米細菌的生長也極為緩慢, 其新陳代謝率僅為普通細菌的萬分之一, 這使得許多基于檢測細菌新陳代謝的微生物學方法無法檢測納米細菌的存在. 由于納米細菌難以用傳統(tǒng)的火焰法和乙醇法固定, 并且大多數(shù)染料無法穿透其細胞壁, 而且不能用普通顯微鏡對其進行觀察, 因此常規(guī)的細菌學染色法并不能檢測到納米細菌的存在. 通過Kajander et al 的研究, 發(fā)現(xiàn)70℃干烤10 min, 可以將其有效固定; 另外, 用茜素紅S、剛果紅以及*染料可以使納米細菌著色; 而培養(yǎng)狀態(tài)下的納米細菌可以在放大400倍的相差顯微鏡下清晰地觀察其生長情況; 用DNA熒光染料 (Dapi或Hoechst) 按普通細菌DNA染色的條件對納米細菌DNA進行染色均不成功, 而當按照線粒體DNA以及病毒DNA染色條件, 對納米細菌DNA進行染色時, 熒光顯微鏡下可以觀察到特征性的熒光; 用納米細菌特異性抗體進行熒光染色也可以清晰地顯示納米細菌的存在; 利用電子顯微鏡對經(jīng)過負染的納米細菌進行觀察, 可以清晰的顯示80-350 nm大小、單獨或聚集成簇的納米細菌以及其表面的生物被膜(biofilm)結構; 而用透射電鏡對納米細菌的超薄切片進行觀察, 可以清晰的顯示其內(nèi)部結構。 可以發(fā)現(xiàn)如下的特點：

   （1） 與細胞共生，細胞長的好或密度大的話，小黑點就少，反之則 多；

   （2） 對抗生素無效；

   （3） 可能通過培養(yǎng)箱空氣進行污染；

   （4） 單用培養(yǎng)液及血清培養(yǎng)沒發(fā)現(xiàn)問題。

   （5） 換掖沖洗后也無效。