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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>細(xì)胞劃痕的特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)步驟
細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)(Wound Healing)是一種操作簡單,經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。這種方法的原理是,當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時,在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個空白區(qū)域,稱為“劃痕"。劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕"愈合。
基本的步驟包括“劃痕"的制造,細(xì)胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。
特點(diǎn):
1,在一定程度上模擬了體內(nèi)細(xì)胞遷移的過程。
2, 非常適合研究細(xì)胞與胞外基質(zhì)(ECM),細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用引起的細(xì)胞 遷移。
3,與包括活細(xì)胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容,可用于分析細(xì)胞間的相互作用。
4,研究細(xì)胞遷移的體外實(shí)驗(yàn)中zui簡單的方法。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1,培養(yǎng)板接種細(xì)胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標(biāo)記(方便拍照時定位同一 個視野)
2,細(xì)胞消化后接入12孔板,數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜(數(shù)量少時可培養(yǎng)一段時間至鋪滿板底)
3, 細(xì)胞鋪滿板底后,用1ml槍頭垂直于孔板制造細(xì)胞劃痕,盡量保證各個劃痕寬度一致。(人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,這也是該方法zui大的缺陷。)
4,吸去細(xì)胞培養(yǎng)液,用PBS沖洗孔板三次,洗去劃痕產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。
5,加入無血清培養(yǎng)基,拍照記錄。
6,將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),每隔4-6小時取出拍照。
7,根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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