人巨噬細(xì)胞可從外周血或經(jīng)斑蝥激發(fā)的皮皰液中獲取，也可從肺灌洗液或患者*中分離，但操作煩瑣，得量不多。許多實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行基礎(chǔ)或配合臨床研究巨噬細(xì)胞功能及其與疾病的關(guān)系、或篩檢免疫增強(qiáng)藥物和探討其作用機(jī)制時(shí)，常選用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象。

(一)鼠腹腔巨噬細(xì)胞制備

1．用*吸取3％硫代乙醇酸鈉3ml，注射于小鼠腹腔內(nèi)。

2．四日后，注射羊紅細(xì)胞(1％懸液)lml于小鼠腹腔內(nèi)。

3．注射1h后，將小鼠用頸椎脫臼法處死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用鑷子輕輕夾起腹膜，將腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml預(yù)溫的PBS，同時(shí)用手反復(fù)揉搓腹腔約1～2min，以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細(xì)胞

4．用尖吸管吸取腹腔液，置一潔凈試管內(nèi)。

5．用尖吸管將腹腔液吹打均勻(盡量避免產(chǎn)生氣泡)，吸取一滴滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。

(二)炭粒廓清試驗(yàn)

正常小鼠肝中庫(kù)普弗細(xì)胞可吞噬清除90％炭粒，脾巨噬細(xì)胞約吞噬清除10％炭粒，據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液)，間隔一定時(shí)間反復(fù)取靜脈血。測(cè)定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細(xì)胞的功能。

(三)吞噬功能的檢測(cè)

1．雞紅細(xì)胞(CRBC)懸液的制備取雞血l～2ml，阿氏液抗凝。試驗(yàn)前用無(wú)菌生理鹽水沖洗3次，然后配成5％CRBC懸液。

2．吞噬試驗(yàn)取皮皰滲出液O．5ml，加上述CRBC懸液0．01 ml混勻，置37℃水浴中30min，每隔10min輕輕搖動(dòng)1次。1000r／mln離心5min，棄上清液。留少許液體將細(xì)胞充分混勻．涂片，甲醇固定，吉姆薩染色，油鏡下觀察并計(jì)數(shù)100～200個(gè)巨噬細(xì)胞。

3．結(jié)果觀察

(1)吞噬細(xì)胞百分率：即100個(gè)巨噬細(xì)胞中吞噬有CRBC的細(xì)胞數(shù)。

(2)吞噬指數(shù)：將100個(gè)巨噬細(xì)胞所吞噬的CRBC的總和除以100，所得每個(gè)巨噬細(xì)胞吞噬CRBC的平均數(shù)，即吞噬指數(shù)。

(四)巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測(cè)定

    巨噬細(xì)胞富含溶酶體酶，如酸性磷酸酶、非特異性酯酶、*等，測(cè)定這些酶的活性也是衡量巨噬細(xì)胞功能的實(shí)用指標(biāo)之一。

1．酸性磷酸酶的測(cè)定。

(1)*法：本法優(yōu)點(diǎn)是用普通試劑，價(jià)格便宜，一般實(shí)驗(yàn)室均有條件做，封片后可較長(zhǎng)時(shí)間保存，并可用電子顯微鏡研究觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。缺點(diǎn)是細(xì)胞必需固定，而且固定條件要求嚴(yán)格，如處理不當(dāng)酶活性易消失，反應(yīng)步驟也較多。

    該法基本原理是在適當(dāng)?shù)拿感詶l件下，巨噬細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶能使8*水解成磷酸鹽后，后者與*反應(yīng)產(chǎn)生磷酸鉛，而磷酸鉛再與硫酸銨反應(yīng)則形成黑色硫化鉛，沉積在胞漿內(nèi)酸所在處，顯示棕黑色顆粒。酶活性強(qiáng)弱可根據(jù)顆粒的數(shù)量和粗細(xì)不同而分級(jí)判斷，顆粒數(shù)量少則細(xì)的為+，顆粒多而粗的為++，顆粒很多且很粗的為+++。

(2)偶氮法：本法操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)液中的底物a一萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后，形成萘酚和磷酸鹽，而萘酚結(jié)構(gòu)中的羥基(OH)鄰近的活潑碳原子，立即與偶氮染料起反應(yīng)，而產(chǎn)生鮮艷的棕色沉積在酶所在處，缺點(diǎn)是封片后保存時(shí)間短。

2．非特異性酶的測(cè)定該酶比較穩(wěn)定，酶活性喪失較慢，細(xì)胞經(jīng)涂片干燥，置室溫至少可保存半天至一天，因此特別有利于臨床檢驗(yàn)室采用。

(五)巨噬細(xì)胞促凝血活性測(cè)定

    激活巨噬細(xì)胞可產(chǎn)生一種與膜結(jié)合的凝血活性因子，加速正常血漿的凝固，為此取已經(jīng)37℃預(yù)溫的正常兔血漿和CaCl2混合液，加入已經(jīng)黏附單層巨噬細(xì)胞的試管中，移置37℃，即時(shí)記錄血漿凝固時(shí)間。實(shí)驗(yàn)證明當(dāng)巨噬細(xì)胞與LPS、腫瘤相關(guān)抗原或HbsAg等溫育后，可見(jiàn)血漿凝固時(shí)間明顯縮短。本法穩(wěn)定方便，也是檢測(cè)不同疾病患者巨噬細(xì)胞功能的指標(biāo)之一。

(六)巨噬細(xì)胞表面受體的檢測(cè)

    成熟的巨噬細(xì)胞表面具有Fc受體和C3b受體，這些受體能識(shí)別經(jīng)IgG和C3b調(diào)理的顆粒，并迅速與之結(jié)合，促使細(xì)胞對(duì)相應(yīng)顆粒的吞噬，為此檢測(cè)這些受體可間接判斷巨噬細(xì)胞的功能。常用抗羊紅細(xì)胞致敏的羊紅細(xì)胞懸液作指示物進(jìn)行EA花環(huán)試驗(yàn)，也可用抗原(E)抗體(A)補(bǔ)體(C)復(fù)合物作EAC花環(huán)試驗(yàn)。