細(xì)胞常見問題

1.血清中可能出現(xiàn)的沉淀物是什么？

    基于多年的實驗研究，用于細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清以及其它血清中可能會存在以下種類的沉淀物：（1）纖維蛋白，它是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到1-2mm，可以用肉眼觀察到。因為血清都是在低溫下進(jìn)行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體）在處理過程中仍然處于溶解狀態(tài)，當(dāng)經(jīng)過zui后的過濾分裝后，就會在瓶中凝結(jié)出現(xiàn)纖維蛋白沉淀。（2）磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使血清出現(xiàn)渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經(jīng)常被誤認(rèn)為是微生物污染。（3）*、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)。他們也是血清中出現(xiàn)沉淀物的常見原因。

2.血清中的沉淀物對細(xì)胞培養(yǎng)有什么影響？

（1）細(xì)胞生長，我們的試驗以及經(jīng)驗表明沉淀物不會影響細(xì)胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點。（2）過濾，如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因為在血清生產(chǎn)時zui后已經(jīng)經(jīng)過100nm或者40nm的過濾處理，并且經(jīng)過了嚴(yán)格的無菌檢測，因此不推薦再過濾用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清。在實驗室中沒有必要再過濾處理血清，在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過濾。（3）污染，磷酸鈣往往被誤認(rèn)為微生物污染而引起爭端。研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會比較警覺的去做無菌試驗，將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天，結(jié)果可能會觀察到更多的絮狀沉淀，因此就斷定血清被污染了。并且當(dāng)研究者將血清樣品放在倒置顯微鏡下觀察時往往可以看到一些可以運動的小黑點，因此就更加確認(rèn)是血清被污染了。于是，研究者就會花費更多的時間和精力來和生產(chǎn)商確認(rèn)，但zui終確定血清沒有被污染而只是沉淀。為了避免這些問題的發(fā)生，我們建議不要直接將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察是否有菌，而是將血清加到瓊脂板上進(jìn)行培養(yǎng)以觀察是否有細(xì)菌生長。另外，也可以進(jìn)行革蘭氏染色，在油鏡下觀察，以確認(rèn)是否有污染。

3.如何避免血清中沉淀物的出現(xiàn)？

    首先要注意正確的血清解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動血清。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：（1）熱滅活血清；（2）在37℃下培養(yǎng)血清；（3）反復(fù)凍融；（4）γ射線照射；（5）長期儲存在2-8℃；（6）在室溫下放置時間過長

4.如何去除血清中的沉淀？

    如想去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝到無菌離心管中，以400g離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這可能阻塞濾膜。

5.冷凍管應(yīng)如何解凍？

    取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。細(xì)胞