線粒體提取檢測試劑盒-血液樣本

本試劑盒可用于從血液中分離完整而純化的線粒體。其制備物，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。但不適用于進(jìn)一步DNA 提取。

樣本處理的方法

1. 血液處理：

血液要求：非肝-素鈉抗凝血，最好使用新鮮血液。對于陳舊血液，由于凍凝過程中冰晶已經(jīng)對細(xì)胞核膜和線粒體膜產(chǎn)生損傷，所以線粒體得率會大大減少，并且完整性也會降低。

a. 對于無核紅細(xì)胞全血（如哺乳動物處周血），取血約5ml（適當(dāng)分成幾管），加入3 倍體積的紅細(xì)胞裂解液（稀釋后的工作液,下同），混勻，800 × g 5 min 離心收集白細(xì)胞。加入1-2ml 紅細(xì)胞裂解液（稀釋后的工作液），吹打重懸白細(xì)胞，合并于一管中，800 × g 5~10 min 離心收集白細(xì)胞。此時(shí)如果白細(xì)胞有可見紅色，可再次用少量(0.5ml)紅細(xì)胞裂解液洗細(xì)一次。

b. 對于有核紅細(xì)胞全血（如禽類全血），取約200-300ul 全血，800 × g 5~10 min 離心收集全細(xì)胞，用生理鹽水或者PBS 清洗兩次，留沉淀去上清。清洗時(shí)請用去尖吸頭吹打。

2. 在收集到的細(xì)胞中，加入1.0 mL 冰預(yù)冷的白細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨20~40 次；

3. 勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管，4℃，1000× g 離心5 min；

4. 取上清，加入一新的離心管中，4℃，1000× g 再次離心5 min（一共兩次離心，完整去核）。

5．取上清，加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底；

6. 在線粒體沉淀中加入0.5 mL 線粒體清洗液重懸線粒體沉淀，4℃，1000× g 離心5 min(再次去核）；

7．取上清，加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心10 min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管

底；

8. 用50 -100μL 線粒體保存液或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項(xiàng)

為保證獲得完整及盡可能多的線粒體，勻漿條件要示：第一是全程低溫操作。第二是快速。第三，如有條件可將勻漿后的碎片在顯微鏡下觀察。