人血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)條件選擇

血小板衍生生長(zhǎng)因子（Platelet derived growth factor，PDGF）是貯存于血小板α顆粒中的一種堿性蛋白質(zhì)。是低分子量促細(xì)胞分裂素。能刺激停滯于G0/G1期的成纖維細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等多種細(xì)胞進(jìn)入分裂增殖周期。血小板衍生生長(zhǎng)因子PDGF于1974年發(fā)現(xiàn)的一種刺激結(jié)締組織等組織細(xì)胞增長(zhǎng)的肽類調(diào)節(jié)因子，因其來(lái)源于血小板而得名，正常生理狀態(tài)下存在于血小板的α顆粒內(nèi)，當(dāng)血液凝固時(shí)由崩解的血小板釋放出來(lái)并且被激活，具有刺激特定細(xì)胞趨化與促進(jìn)特定細(xì)胞生長(zhǎng)的生物活性。此外，在組織受到損傷時(shí)巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞等也可以合成并釋放PDGF。肝臟受損時(shí)，巨噬細(xì)胞、血小板、浸潤(rùn)的炎細(xì)胞、受損的內(nèi)皮細(xì)胞及激活的肝星形細(xì)胞均可以分泌PDGF。以自分泌、旁分泌的方式發(fā)揮作用。結(jié)合的PDGF是分子量為30KD的熱穩(wěn)定糖蛋白，是靠二硫鍵相連的A、B兩條多肽鏈組合成的二聚體。

在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:

　?。?）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

　　（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg/ml。

　?。?）　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

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