IP類實驗代測的介紹

免疫共沉淀(Co-IP 蛋白與蛋白)

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。 當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在agarose beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。 這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。

CHIP實驗（DNA-蛋白相互作用）
染色質免疫沉淀技術的原理是：在生理狀態(tài)下把細胞內的DNA與蛋白質交聯(lián)在一起，通過超聲或酶處理將染色質切為小片段后，利用抗原抗體的特異性識別反應，將與目的蛋白相結合的DNA片段沉淀下來。染色質免疫沉淀技術一般包括細胞固定，染色質斷裂，染色質免疫沉淀，交聯(lián)反應的逆轉，DNA的純化，以及DNA的鑒定。因為ChIP實驗涉及的步驟多，結果的重復性較低，所以對ChIP實驗過程的每一步都應設計相應的對照，而且對結果的分析也需要有一定的經驗。對于剛剛開始使用ChIP技術的研究人員來說，使用成熟的商品化試劑盒和相關的技術服務會達到事半功倍的效果。

Clip實驗（RNA-蛋白相互作用）
核小體組蛋白可以發(fā)生多種翻譯后的共價修飾，如乙?；⒓谆?、磷酸化、泛素化等，這些共價修飾與真核基因的表達密切相關。根據“組蛋白密碼"假說，組蛋白的各種共價修飾的組合會以協(xié)同或拮抗的方式誘導特異的下游生物學功能，因此，ChIP也為研究組蛋白修飾在基因表達中的作用，全面闡明真核基因的表達調控機制提供了強有力的研究工具。
該技術主要應用于：
1.組蛋白修飾酶的抗體作為“生物標記"
2.轉錄調控分析
3.藥物開發(fā)研究
4.有絲分裂研究
5.DNA損失與凋亡分析

RIP技術（RNA結合蛋白免疫沉淀）
RIP這種新興的技術運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合物沉淀下來，然后經過分離純化就可以對結合在復合物上的RNA進行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色質免疫沉淀ChIP技術的類似應用，但由于研究對象是RNA-蛋白復合物而不是DNA-蛋白復合物，RIP實驗的優(yōu)化條件與ChIP實驗不太相同（如復合物不需要固定，RIP反應體系中的試劑和抗體絕對不能含有RNA酶，抗體需經RIP實驗驗證等等）。RIP技術下游結合microarray技術被稱為RIP-Chip，幫助我們更高通量地了解癌癥以及其它疾病整體水平的RNA變化。
RIP 實驗基本原理： 1. 用抗體或表位標記物捕獲細胞核內或細胞質中內源性的RNA結合蛋白。 2. 防止非特異性的RNA的結合。 3. 免疫沉淀把RNA結合蛋白及其結合的RNA一起分離出來。 4.結合的RNA序列通過microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量測序（RIP-Seq）方法來鑒定。 延伸閱讀：95%的人類基因組并不編碼基因，而是產生大量的非編碼RNA,真正編碼蛋白質的基因只占人類總基因組的約2%。這些非編碼RNA在生命的生長發(fā)育的各個階段都發(fā)揮著重要的調節(jié)作用，與艾滋病、白血病、糖尿病、畸形等多種病變密切相關，并且參與著干細胞和表觀遺傳學調控。

MeRIP-PCR（m6A RNA甲基化）
MeRIP-Seq (methylated RNA immunoprecipitation sequencing)結合RNA-蛋白免疫共沉淀和高通量測序技術，可實現全轉錄組水平上RNA甲基化分析。由于甲基化修飾約占所有RNA修飾的60% 以上，而N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine，m6A），作為最常見的一種轉錄后修飾，介導了超過80%的RNA甲基化?；贛eRIP-Seq分析RNA甲基化模式，加速了癌癥發(fā)生和轉移、胚胎發(fā)育、脂類代謝、環(huán)狀RNA翻譯和DNA損傷修復等生物學功能和作用機制的研究。

服務類型如下：
免疫共沉淀(Co-IP 蛋白與蛋白)
CHIP實驗（DNA-蛋白相互作用）
RIP技術（RNA結合蛋白免疫沉淀）
Clip實驗（RNA-蛋白相互作用）
MeRIP-PCR（m6A RNA甲基化）

IP類實驗代測的介紹