ATP生物發(fā)光檢測試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)，咨詢！

• 產(chǎn)品組成、儲存、穩(wěn)定性：

儲存：未打開包裝前避光儲存于-20℃，打開包裝后根據(jù)產(chǎn)品說明書上的單個(gè)組分的儲存條件保存。避免反復(fù)凍融以及ATP污染。

• 產(chǎn)品介紹：

利用螢火蟲熒光素酶催化底物熒光素的轉(zhuǎn)化，利用ATP的能量發(fā)射出光子。發(fā)光信號與存在的ATP量呈正比的原理進(jìn)行ATP的生物發(fā)光檢測。該產(chǎn)品可用于快速、定量測定液體樣品中或細(xì)胞或組織內(nèi)的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。產(chǎn)品中的Lysis Buffer能夠有效裂解細(xì)菌、細(xì)胞以及微生物樣品，充分釋放ATP，適用于多種樣本來源的ATP檢測。Luciferase/Luciferin substrate采用優(yōu)化的酶反應(yīng)體系，產(chǎn)生的熒光在一分鐘內(nèi)保持穩(wěn)定。該產(chǎn)品檢測靈敏度達(dá)到10^-16 mol，檢測范圍在10^-11至10^-16 mol之間，可用于微量ATP檢測。

• 適用范圍：

可用于檢測多種來源樣品中細(xì)菌、細(xì)胞以及微生物的ATP，及微量ATP檢測。

• 產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.  方便：反應(yīng)試劑容易配制。

2.  檢測試劑產(chǎn)生的熒光穩(wěn)定性高，不需要快速混勻操作。

3.  快速：樣品裂解在5-10分鐘內(nèi)完成，加入稀釋后的Luciferase/Luciferin substratet即可檢測。

4.  靈敏：可檢測少至10^-16 mol ATP。

• 操作步驟：
  1. 試劑準(zhǔn)備：

（1）稀釋Lysis Buffer：將Lysis Buffer室溫溶化，用無菌水5倍稀釋使用。（為避免ATP污染，請使用無菌水稀釋）。置于4℃保存。

（2）配制Luciferase/Luciferin Reagent：L/L Dilution Buffer室溫溶化后，作為稀釋液將Luciferase/Luciferin substrate進(jìn)行50倍稀釋，配制成Luciferase/Luciferin Reagent，分裝后-20℃保存。測定前取出平衡至室溫使用，凍融次數(shù)不超過3次。

（3）ATP標(biāo)準(zhǔn)品的配制：用Lysis Buffer將ATP母液稀釋至10^-12至10^-17mol/ul的濃度，分別取10ul進(jìn)行檢測，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，即在10^-11至10^-16mol ATP范圍內(nèi)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，呈很好的線性關(guān)系。配制方法參考下表：

2. 樣品裂解：    

貼壁細(xì)胞的裂解：
吸除培養(yǎng)液，加入足夠覆蓋細(xì)胞的Lysis Buffer（如24孔細(xì)胞培養(yǎng)板加入150ul Lysis Buffer），可以使用移液器進(jìn)行反復(fù)吹打或晃動(dòng)培養(yǎng)板使Lysis Buffer充分接觸并裂解細(xì)胞，室溫靜置5-10min后，吸取上清進(jìn)行檢測。

懸浮細(xì)菌、細(xì)胞的裂解：
轉(zhuǎn)移懸浮液到1.5ml離心管中，離心沉淀細(xì)胞，棄盡上清，按照24孔板每孔的細(xì)胞量對應(yīng)150μl Lysis Buffer的比例加入Lysis Buffer，移液器反復(fù)吹打幾次，室溫靜置5-10分鐘后，吸取上清進(jìn)行檢測。

對于懸浮樣品的裂解也可以將樣品充分混勻后直接吸取適量體積加入Lysis Buffer，移液器反復(fù)吹打幾次，室溫靜置5-10分鐘后進(jìn)行檢測。樣品體積不超過Lysis Buffer的1/3。

對植物、動(dòng)物組織樣品的裂解：
取適量組織樣品，加入適當(dāng)比例的Lysis Buffer（如20mg植物組織加入500ul Lysis Buffer）后用玻璃勻漿器或研缽進(jìn)行勻漿。充分勻漿可以確保組織被*裂解，離心后取上清進(jìn)行檢測。

其它來源的ATP：

對于其它有效方法如三氯乙酸法等提取的ATP樣品，或游離ATP的檢測，可直接稀釋到檢測范圍后用配制好的Luciferase/Luciferin Reagent進(jìn)行檢測。
3. 樣品測定：
（1）ATP標(biāo)準(zhǔn)品的測定：吸取50ul配制好的Luciferase/Luciferin Reagent加入測定管中，放置2分鐘以減少背景發(fā)光值，加入10ul 配制好的ATP標(biāo)準(zhǔn)品，移液器輕輕吹打幾次，立即進(jìn)行檢測。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的同時(shí)設(shè)置陰性對照，即不添加ATP，直接將10ul Lysis Buffer加入50ul Luciferase/Luciferin Reagent中進(jìn)行檢測，測定試劑的背景發(fā)光值。如果背景發(fā)光值過高，可以將配制好的Luciferase/Luciferin Reagent放入測定管后室溫放置15分鐘以消耗ATP，降低背景發(fā)光值。

（2）樣品的測定：吸取50ul Luciferase/Luciferin Reagent加入測定管中，加入10ul 樣品裂解混合液，移液器輕輕吹打幾次，立即進(jìn)行檢測。
（3）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中ATP的濃度。

• 注意事項(xiàng)：

• 操作過程中需注意避免ATP污染，尤其是檢測微量ATP時(shí)，配制試劑時(shí)需用無菌水，使用的吸頭需滅菌，操作時(shí)戴一次性手套。
• Luciferase活性可被多種去污劑抑制，其佳pH為7-8之間，本試劑盒提供的裂解液用量不超過10ul時(shí)對Luciferase/Luciferin Reagent發(fā)光值沒有影響，但是如果需要采用其它裂解方法提取ATP時(shí)，需考慮裂解液成分對luciferase活性的影響。
• 配制好的Luciferase/Luciferin Reagent在室溫放置6小時(shí)，4℃放置7天內(nèi)發(fā)光值下降在10%之內(nèi)，因此檢測微量ATP時(shí)，為了降低背景發(fā)光值，可將Luciferase/Luciferin Reagent室溫放置6小時(shí)內(nèi)或4℃放置7天內(nèi)以充分消耗ATP。

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