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技術(shù)文章

ELISA標(biāo)本如何制備和貯存?

閱讀:125發(fā)布時間:2015-12-16

檢測可溶性蛋白:根據(jù)產(chǎn)品說明書制備血清、血漿標(biāo)本,由于有些樣品對溫度敏感極易喪失活性,應(yīng)盡快分離并分裝(一般300~500ul/管),大多數(shù)標(biāo)本收集和實驗在同一天應(yīng)貯存在2~8℃。若無法立即測定,應(yīng)貯存在-70℃,標(biāo)本貯存時間一般不宜過長,避免反復(fù)凍融。使用前將標(biāo)本平衡至室溫,融化標(biāo)本嚴(yán)禁使用水浴鍋。凍存后或冷藏時間過長的標(biāo)本可能會出現(xiàn)沉淀或小凝集塊,應(yīng)在實驗前離心或過濾(0.45um濾膜)標(biāo)本,體積少的標(biāo)本不建議過濾。所有標(biāo)本的收集要使用無菌管,在無菌/半無菌條件下操作防止污染。

  血清:將血液在室溫凝集10~15分鐘,1500g離心20~30分鐘,小心吸取血清。

  血漿:按試劑盒中的說明書選擇抗凝劑。收集血液時,輕輕搖動試管使抗凝劑與血液充分混合。將血液在室溫保存 10~15分鐘,1500g離心15~20分鐘,小心吸上層血漿。

  尿液:將尿液收集在無菌的容器內(nèi)。1500g離心10~15分鐘或過濾(0.45um濾膜)去除雜質(zhì)。注意:對于尿液標(biāo)本實驗的回歸系數(shù)可能發(fā)生變化。

  細(xì)胞培養(yǎng)上清液:1500g離心10~15分鐘去除細(xì)胞和細(xì)胞殘渣。若使用常規(guī)典型的培養(yǎng)基,應(yīng)制備兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線,一條使用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液/或?qū)嶒灳彌_液配制標(biāo)準(zhǔn)品,另一條以細(xì)胞培養(yǎng)基配制標(biāo)準(zhǔn)品。若兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線的變化范圍在10%內(nèi),實驗結(jié)果可用任一曲線分析。

檢測細(xì)胞相關(guān)和細(xì)胞內(nèi)蛋白:細(xì)胞相關(guān)蛋白和其它細(xì)胞內(nèi)蛋白在ELISA實驗前需要對標(biāo)本進(jìn)行處理將目的蛋白釋放出來。


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