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技術(shù)文章

大鼠白介素 18(IL-18)ELISA 檢測(cè)試劑盒說明書

閱讀:157發(fā)布時(shí)間:2016-10-9

本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

大鼠白介素 18(IL-18)ELISA 檢測(cè)試劑盒使用說明書

 

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被大鼠白介素18(IL-18)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠白介素18(IL-18)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

 

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘

取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

 

自備物品

1. 酶標(biāo)儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

 

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在 2-8℃,使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.  預(yù)理后的樣本無需稀釋,直接取 10μL 加樣即可。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

 

試劑盒組成

名稱            96 孔配置    48 孔配置      備注

微孔酶標(biāo)板    12 孔×8 條    12 孔×4 條     無

標(biāo)準(zhǔn)品             0.3mL        0.3mL        

*          6mL         3mL         

檢測(cè)抗體-HRP        10mL        5mL         

20×洗滌緩沖液      25mL        15mL      按說明書進(jìn)行稀釋

底物 A              6mL         3mL          

底物 B              6mL         3mL          

終止液              6mL         3mL          無

封板膜              2 張         2 張         

說明書              1 份         1 份         

自封袋              1 個(gè)         1 個(gè)         

注:標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:160、80、40、20、10、5  pg/mL.

 

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

 

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板 5 次。

2.  自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液 350μL,浸泡 1min,洗板 5 次。

 

操作步驟

1.  從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL,再加* 40μL;

4.  隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置 1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板 5 次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物 A、B 各 50μL,37℃避光孵育 15min。

7.  每孔加入終止液 50μL,15min 內(nèi),在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值。

 

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在 Excel 工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對(duì)應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。  

 

試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值,大于等于0.9900。

2.  靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于 1.0  pg/mL。

3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。

5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6.  有效期:6 個(gè)月

 

免責(zé)聲明

1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),否則所產(chǎn)生的一切后果,由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé)。

2.   嚴(yán)格按照說明書操作,實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作,后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。 


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