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上海極威生物為大家介紹elisa樣本的處理方法

閱讀:220發(fā)布時(shí)間:2017-6-6

ELISA實(shí)驗(yàn)是實(shí)驗(yàn)室zui常見的實(shí)驗(yàn)方法之一,可用于elisa測定的標(biāo)本十分廣泛,包括體液(如血清、血漿)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、細(xì)胞培養(yǎng)上清、細(xì)胞、組織勻漿等均可作標(biāo)本以測定其中某種成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定,有些則需經(jīng)預(yù)處理。下面我們來詳細(xì)介紹一下各種樣本具體的處理方法及保存:

ELISA常見樣本之:血清樣本:

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

Elisa常見樣本之:血漿樣本:

根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

Elisa常見樣本之:尿液、胸腹水、腦脊液:

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

Elisa常見樣本之:細(xì)胞培養(yǎng)上清:

檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBSPH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

Elisa常見樣本之:細(xì)胞樣本:

檢測細(xì)胞的成份時(shí),對于貼壁細(xì)胞,去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞10秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。對于懸浮細(xì)胞,離心收集細(xì)胞,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適量裂解液,用槍吹打把細(xì)胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)操作。

Elisa常見樣本之:組織標(biāo)本:

切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS或組織蛋白萃取試劑,緩沖液中可加入蛋白酶抑制劑。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

以上為elisa實(shí)驗(yàn)中常見樣本的處理方法詳細(xì)介紹,其他樣本處理方法可上海極威生物科技有限公司。


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