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上海一研生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第11年

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水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)gos9基因LAMP試劑盒反應(yīng)五要素

時(shí)間:2022/12/20閱讀:750
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水稻內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)gos9基因LAMP試劑盒反應(yīng)五要素:


參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:


①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。


②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。


③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。


⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。


⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。


⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。


引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

葡萄糖銨培養(yǎng)基100g用于鑒別細(xì)菌利用銨鹽作為氮源并分解葡萄糖的試驗(yàn)。

尿素瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)250g用于鑒別腸道菌尿素酶試驗(yàn)

緩沖動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基250g供產(chǎn)氣莢膜梭菌動(dòng)力和硝酸鹽還原測(cè)定用

動(dòng)力—硝酸鹽培養(yǎng)基(A法)250g供鑒別測(cè)定細(xì)菌液化明膠用

明膠培養(yǎng)基(營(yíng)養(yǎng)明膠)100g供測(cè)定細(xì)菌液化明膠使用

克氏雙糖鐵瓊脂250g用于鑒別腸道菌發(fā)酵葡萄糖和乳糖,及產(chǎn)生硫化氫的生化反應(yīng)。(ISO)

水解酪蛋白胨(MH)瓊脂250g適用于擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

水解酪蛋白胨(MH)肉湯100g適用于稀釋法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

高氏合成1號(hào)瓊脂培養(yǎng)基250g供放線菌培養(yǎng)用。

馬鈴薯葡萄糖半固體瓊脂250g用于椰毒假單胞菌酵米面亞種的產(chǎn)毒培養(yǎng)

馬鈴薯葡萄糖水250g用于椰毒假單胞菌酵米面亞種的檢驗(yàn)。(GB)

GVC增菌液250g用于椰毒假單胞菌酵米面亞種的增菌培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂(椰毒假單胞)250g用于椰毒假單胞菌酵米面亞種的計(jì)數(shù)和分離

亞碲酸鉀(四號(hào)瓊脂凍干配套試劑)5mg/支x10每支添加于500ml(025030)中配成四號(hào)瓊脂培養(yǎng)基。

弧菌顯色培養(yǎng)基選擇性添加劑凍干試劑10支每支添加于100ml(CRM008)弧菌顯色培養(yǎng)基中。

Skirrow瓊脂配套試劑10支/盒每支添加于100mL的 Skirrow瓊脂基礎(chǔ)中

改良CCD瓊脂配套試劑10支/盒每支添加于100ml(022212)中配成MLST

Bolton肉湯配套試劑10支/盒每支添加于100mL的 Bolton 肉湯基礎(chǔ)中

10支/盒每支添加于100ml(022212)中配成MLST

亞碲酸鉀(亞碲酸鹽肉湯凍干配套試劑)2mg/支x10每支添加于100ml(022011)中配成亞碲酸鹽肉湯。



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